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熒光定量pcr,以及內(nèi)參基因的選擇。
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我克隆了一個魚的以前不知道序列的基因。2700bp。我想做一個熒光定量PCR，該如何做？我的初步想法是找這個魚的管家基因做內(nèi)參，分別設(shè)計合成內(nèi)參和目的基因的熒光定量PCR引物，然后就可以做了對嗎？但是這個魚的管家基因沒找到，能不能用其他魚類的代替？這樣做出來的熒光定量PCR有意義嗎？以前沒做過，謝謝高手指點。 |
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新人小玥
木蟲 (正式寫手)
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1，你做qPCR的意義何在？確定了有必要做，然后進行下一步。 2，找管家基因可以按你的方法，可以選擇幾個備用的，在不同的組織或者不同的階段（就是用不同的材料）試試，選擇一個到兩個用來做你的內(nèi)參。 3，若你要做目的基因的話，就按qPCR的引物設(shè)計條件，設(shè)計合適的引物唄。 最最重要的就是，你要確定為什么要做qPCR，能解釋什么問題，在整個實驗設(shè)計中起到什么作用。 |
2樓2013-05-09 23:03:08
3樓2013-05-10 09:25:40
zhaolf
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1.就一個目的基因和一個內(nèi)參這樣做相對定量有意義嗎？ 即使只有目的基因和內(nèi)參基因的相對定量，也是有意義的。 2.要不要做一個cdna濃度梯度什么的？ 這個濃度梯度是在做qRT-PCR之前檢測引物擴增效率的，目的基因和內(nèi)參基因的引物都要做。 3.你說的沒錯，目前首要任務(wù)是選擇好的內(nèi)參基因，祝你好運！ |
4樓2013-05-10 10:40:38
5樓2013-05-10 11:19:27
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