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yaomoon新蟲 (小有名氣)
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熒光定量PCR與普通PCR產物不一樣？
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我做熒光定量PCR,用Oligo6 設計的基因引物，擴增片段長度為91bp, 擴增產物的Tm值79.9。我先用普通PCR進行擴增，擴增條件為94℃,5min; 94℃.30s, 60℃ 30s, 72℃ 30s; 35個循環(huán)； 72℃ 10min。擴增的產物電泳檢測后發(fā)現有200多bp并且只有一條帶（具體圖沒有拍下來）。但是我同樣的引物在熒光定量pcr儀上擴增其溶解曲線的Tm值為79℃多一點，基本與我設計的一致。具體圖見附件。（其中熒光定量的擴增條件與普通PCR不太一樣，我是采用的Takara試劑盒說明書上的兩步法）。請問這是怎么一回事？ 本人知道怎么發(fā)金幣，請版主代勞發(fā)給前20位回答問題的蟲友。 |
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