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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
【求助】WB中，核蛋白內參和總蛋白內參的問題 已有11人參與
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| 被告知核蛋白內參Histone和總蛋白內參貝塔-actin分別是用于核蛋白的蛋白衡量和總蛋白的蛋白衡量，但是我不知道為什么要這樣，那么如果用Histone用于總蛋白的蛋白定量會怎么樣？或者actin用于核蛋白的衡量會怎么樣？謝謝了 |
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8樓2012-01-13 16:24:28
三磷酸腺苷
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2樓2011-04-13 21:46:47
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3樓2011-04-14 11:50:19
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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silicare(EPI+1): 2011-04-18 18:57:07
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有些人提取蛋白會選擇胞漿、胞核分開提取，不提取總蛋白，所以做內參要選擇相應部位表達穩(wěn)定的蛋白。beta-actin在胞漿中表達高效穩(wěn)定，而總蛋白主要成分就是胞漿蛋白，所以beta-actin可以作為總蛋白的內參。理論上細胞核內不表達beta-actin，所以不能用于核蛋白內參。同理，細胞核內的蛋白用于做總蛋白的內參，自然也不合理，內參自當選擇與目的蛋白表達部位相同的蛋白才有說服力。 實際情況中，無論什么試劑盒，都不可能完全將胞漿、胞核蛋白完全分離開，提取時總會有交叉污染。就是提取的核蛋白肯定會有beta-actin，而胞漿蛋白也會有核蛋白的存在，所以你用兩種蛋白做內參都能有結果，只是有的科學合理，有的不科學，沒有說服力。 |
4樓2011-04-14 16:30:01
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