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xiajing_acm新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助細(xì)胞周期檢測(cè)前關(guān)于細(xì)胞收集等的疑惑
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各位大俠： 你們好！小弟要做細(xì)胞周期檢測(cè)，有些細(xì)節(jié)問題不太明確，請(qǐng)幫忙指導(dǎo)下： 1、在細(xì)胞收集的時(shí)候，是不是連同孔板里的細(xì)胞培養(yǎng)液一起收集，再加胰酶消化細(xì)胞然后在將它們收集到一起呢？經(jīng)過藥物作用以后，細(xì)胞肯定有部分細(xì)胞壞死而漂浮起來(lái)，不知道這樣的細(xì)胞是不是也要收集呢？ 2、細(xì)胞收集以后，固定時(shí)，是將細(xì)胞滴加到7預(yù)冷70%乙醇里面比較好呢？還是先用PBS混懸細(xì)胞然后加乙醇到所需濃度呢？ 3、細(xì)胞固定過夜后細(xì)胞沉淀是不是需要多用PBS清洗幾遍才能吹散而均勻��？ 謝謝各位的指導(dǎo)，懇請(qǐng)大家指點(diǎn)！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
xiajing_acm(金幣+5): 2011-08-10 13:59:55
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1 我做時(shí)是連同培養(yǎng)液一起收集的，胰酶終止消化時(shí)用此培養(yǎng)液終止即可。不收集的 話勢(shì)必會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性有較大影響 2 細(xì)胞固定時(shí)，用300微升PBS將細(xì)胞重懸，緩緩滴加到700微升遇冷的無(wú)水乙醇中。此方法可保證乙醇的比例 3 PBS洗得次數(shù)按照試劑盒說明書進(jìn)行即可，細(xì)胞是否均勻懸浮在乙醇中與PBS洗得次數(shù)無(wú)關(guān)，與你收集的細(xì)胞數(shù)、懸浮溶液的量、是否充分震搖有關(guān) |
3樓2011-08-05 10:01:50
tube1031aaa
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2樓2011-07-01 09:02:21
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