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1949stone榮譽(yù)版主 (知名作家)
海納百川
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[求助]
長(zhǎng)片段測(cè)序
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長(zhǎng)片段測(cè)序的方法有哪些好一點(diǎn)（性?xún)r(jià)比最好的） 可以提供幾個(gè)公司么？ 片段大概有13000bp左右 沒(méi)有特殊結(jié)構(gòu) 就是線(xiàn)粒體的一部分 謝謝了 |
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nickychen
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4樓2011-07-04 16:36:08
gwbk
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
1949stone(金幣+4): 我想知道長(zhǎng)片段測(cè)序呢 1萬(wàn)多的片段 2011-07-04 16:43:09
dhd997(金幣+3): good 2011-07-04 18:03:02
1949stone(金幣+4): 我想知道長(zhǎng)片段測(cè)序呢 1萬(wàn)多的片段 2011-07-04 16:43:09
dhd997(金幣+3): good 2011-07-04 18:03:02
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生工和金斯瑞標(biāo)稱(chēng)都是用的ABI-PRISM3730，號(hào)稱(chēng)國(guó)際先進(jìn)： 我的生工測(cè)序說(shuō)明，序列長(zhǎng)度5000bp做定點(diǎn)。 測(cè)序結(jié)果：與NCBI序列完全相同（定點(diǎn)突變除外）。 測(cè)序時(shí)，由于熒光染料的干擾，測(cè)序結(jié)果在引物3'端后面的10至30個(gè)，嚴(yán)重時(shí)可能達(dá)到70個(gè)以上堿基不一定能夠準(zhǔn)確判讀，需您根據(jù)自己的已知序列信息及測(cè)序彩圖作出判斷。 所用測(cè)序儀器為ABI-PRISM3730，測(cè)序試劑為BigDyeterminator v3.1。ABI公司對(duì)儀器的性能說(shuō)明為：正常情況下，除了開(kāi)始約10至30個(gè)堿基，在650bp以?xún)?nèi)可以達(dá)到98.5%以上的準(zhǔn)確率，但儀器及軟件有時(shí)也會(huì)發(fā)生錯(cuò)讀或漏讀堿基的情況，此時(shí)需要您自己判斷具體是什么堿基。所以，一般只有進(jìn)行正反鏈同時(shí)測(cè)序，在兩個(gè)序列完全吻合的情況下，才能確保所得序列100%可靠。單靠一個(gè)方向測(cè)序得到完全準(zhǔn)確的序列是幾乎不可能的，這是由儀器本身的性能指標(biāo)決定的。 正常情況下，一個(gè)測(cè)序反應(yīng)可以得到800bp以上，但一般在700bp以后的序列只能作為參考。 也可以考慮華大基因，以前聯(lián)系過(guò)，￥50000測(cè)4M的基因組，性?xún)r(jià)比較高，還附帶基因組標(biāo)注，大片段是他們的強(qiáng)項(xiàng)。 |
2樓2011-07-04 15:56:07
beautybanana
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★ ★
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 00:46:16
西瓜(金幣+2): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-05 00:46:16
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這個(gè)你可以打電話(huà)問(wèn)問(wèn)一些公司負(fù)責(zé)測(cè)序的業(yè)務(wù)員，有的業(yè)務(wù)員可能也不太明白則可以問(wèn)問(wèn)技術(shù)支持，現(xiàn)在測(cè)序也不是件難事，一般的準(zhǔn)確度我覺(jué)得差別不大，誤差應(yīng)該都在所規(guī)定的范圍內(nèi)，就是服務(wù)質(zhì)量問(wèn)題，價(jià)格可能略有差異，我知道的一些公司，一般上海這邊的有invitrogen,上海生工,還有大連的TaKaRa公司，價(jià)格可以在他們的網(wǎng)站上看看。 |
3樓2011-07-04 15:56:39
足下客
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
dhd997(金幣+3): good 2011-07-04 18:03:15
1949stone(金幣+4): 謝謝 2011-07-05 10:43:02
dhd997(金幣+3): good 2011-07-04 18:03:15
1949stone(金幣+4): 謝謝 2011-07-05 10:43:02
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曾經(jīng)有一段時(shí)間都是讓英駿（現(xiàn)在的英杰公司）測(cè)序，后來(lái)發(fā)現(xiàn)他們有時(shí)候的速度實(shí)在是太慢了�，F(xiàn)在都是在美吉測(cè)，感覺(jué)還不錯(cuò)。 華大基因的全基因組測(cè)序應(yīng)該是比較可靠的吧。 但我覺(jué)得5K也不算太長(zhǎng)，所以一般的公司都能測(cè)的。 |
5樓2011-07-04 16:55:44
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