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xiaohong88銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌體生長(zhǎng)量
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各位好： 我對(duì)一株放線菌進(jìn)行種子培養(yǎng)基的優(yōu)化，看到有的文獻(xiàn)說指標(biāo)為菌絲生長(zhǎng)量。我想問一下這個(gè)菌絲生長(zhǎng)量是指穩(wěn)定期的菌絲量嗎？是不是穩(wěn)定期的菌絲量比較大，在一定的程度上也表明對(duì)數(shù)期的生長(zhǎng)速率比較快？ |
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iaminxanadu
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2樓2011-07-07 09:58:35
iaminxanadu
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3樓2011-07-07 10:01:49
iaminxanadu
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 總是自己自動(dòng)發(fā)帖呢？ 種子的質(zhì)量包括了種子數(shù)量，但不是全部。然而我們做發(fā)酵時(shí)一般都說接種量百分之多少。這就需要考慮更多的信息，種子長(zhǎng)到什么程度了，成熟了嗎？實(shí)質(zhì)就是一種代謝狀態(tài)，有的種子是拿生物量衡量，有的是拿pH。。。。很多。但你這一優(yōu)化好像就不行了，組分變了啊~ 所以，最好是拿發(fā)酵效價(jià)作為指標(biāo)。 即，先限定一個(gè)時(shí)間，之后每隔N小時(shí)后去接發(fā)酵 根據(jù)最終發(fā)酵結(jié)果來評(píng)判用哪個(gè)組分、那個(gè)狀態(tài)的種子 |
4樓2011-07-07 10:08:31
xiaohong88
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5樓2011-07-08 15:30:24
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6樓2011-07-08 15:33:24
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您好，我又重新看了您的帖子，并再思考了一下 1、您之前提到的說把種子液進(jìn)行培養(yǎng)，每隔N個(gè)小時(shí)后拿去進(jìn)行發(fā)酵，這就相當(dāng)于是在做種齡的實(shí)驗(yàn)了吧。 2、而我現(xiàn)在要做的是種子液培養(yǎng)基的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，那就相當(dāng)于只是改變培養(yǎng)基的成分，而所有其它的因素都先把它固定下來，包括種齡也要固定下來。 3、我現(xiàn)在還有幾個(gè)問題感到有點(diǎn)困惑，想要請(qǐng)教一下，我一開始把無菌水倒入斜面，制備孢子懸浮液，這個(gè)無菌水的量應(yīng)該是多少，怎么來確定呢?完了之后，我再按照一定的比例接入有不同比例的種子培養(yǎng)基中。到了這一步后，我看了許多的文獻(xiàn)，文獻(xiàn)上都有確定的時(shí)間，比例說培養(yǎng)了20小時(shí)，或是12小時(shí)的，完了之后再進(jìn)行發(fā)酵。我想問這個(gè)時(shí)間他們是怎么確定的？是之前已經(jīng)做了生長(zhǎng)曲線，知道在相同的條件下這個(gè)時(shí)間段是對(duì)數(shù)期嗎？ 謝謝！ |
7樓2011-07-12 21:39:35
iaminxanadu
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander(金幣+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
rainwander(金幣+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
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首先回答一下孢子懸液的問題。 工業(yè)上一般制作孢子都是用裝液量是100ml茄形瓶來做，最后等孢子成熟后加50ml甘油水或DMSO（20%），刮下玻璃珠振蕩，分裝1~1.5ml。保存。 實(shí)驗(yàn)室里9厘米的平板，20ml...... 這也只是一個(gè)習(xí)慣做法，不是每種防線菌都一定要這樣。但要保證孢子濃度，一般不低于10^9ml^-1 再來說一下原來的問題。 種子的培養(yǎng)基優(yōu)化也好、種齡也好，本質(zhì)上是相聯(lián)系的。不能單純的拿一個(gè)指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化，即便你看到某些文獻(xiàn)這樣做了，那是為了研究影響因素。 你固定了種齡去優(yōu)化培養(yǎng)基時(shí)，會(huì)得到較優(yōu)的結(jié)果，但這里面可能存在遺漏。 比如說，你固定在35小時(shí)。開始實(shí)驗(yàn)：第一組配方A1+B2+C3+D4，第二組A2+B3+C4+D1.......，你得出了第一組結(jié)果最好。但很可能你要是延長(zhǎng)或縮短了種齡，第二組的結(jié)果會(huì)更好。 所以，要看發(fā)酵結(jié)果來反推哪個(gè)培養(yǎng)基，哪個(gè)時(shí)間的培養(yǎng)基最佳。 不知道，我說的清楚不？  |
8樓2011-07-13 09:11:31
iaminxanadu
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander(金幣+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
rainwander(金幣+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
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還有個(gè)問題剛看到。關(guān)于種齡的確定。 文獻(xiàn)上的時(shí)間，當(dāng)然是通過大量實(shí)驗(yàn)摸索的啊。 并且不是通過生長(zhǎng)曲線來確定的。生長(zhǎng)曲線很明確的分了幾個(gè)階段，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期來說，也不是一個(gè)點(diǎn)，是一段時(shí)間，那么怎么種齡的時(shí)間一般都說成一個(gè)點(diǎn)：比如培養(yǎng)24小時(shí)，或培養(yǎng)36小時(shí)，但很少說培養(yǎng)20~24小時(shí)。即便有，那也是通過實(shí)驗(yàn)知道了這段時(shí)間都行（影響不大），或者是一種估測(cè)，或者是為了保密。 前階段我發(fā)了個(gè)相關(guān)的帖子，忘了在哪了�？傊�，生長(zhǎng)曲線的不是那么重要，重要的是看種子的狀態(tài)，生理狀態(tài)的“好壞”，要看對(duì)發(fā)酵結(jié)果的影響。 一個(gè)種子培養(yǎng)基里都是葡萄糖，長(zhǎng)的沒的說，本來28小時(shí)成熟，現(xiàn)在呢14小時(shí)OK了，敢用嗎？ 剛開始的回帖中，我說的就是這個(gè)意思。14小時(shí)的種子也長(zhǎng)夠了，但生理狀態(tài)呢？微觀上的基因表達(dá)呢？是不是培養(yǎng)過程中淀粉利用相關(guān)的酶類轉(zhuǎn)錄表達(dá)過程變化了？會(huì)不會(huì)影響下游發(fā)酵？會(huì)不會(huì)富集了那些懶漢？到發(fā)酵培養(yǎng)里誰(shuí)干活？怎么產(chǎn)出？ 首先得知道種子培養(yǎng)的目的是什么？ 種子培養(yǎng)就是為發(fā)酵做準(zhǔn)備。這種準(zhǔn)備既是量上的準(zhǔn)備，也是質(zhì)上的準(zhǔn)備。配方也是作為一種過渡。即在一定時(shí)間內(nèi)獲得一定生理狀態(tài)的菌體。 為什么看起來這么糾結(jié)呢？因?yàn)椋覀冞�沒有透徹的了解這個(gè)過程，這個(gè)過程的關(guān)鍵點(diǎn)是什么不知道，所以不能只看種齡。 |
9樓2011-07-13 09:34:05
xiaohong88
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