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xiaohong88銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌體生長量
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各位好： 我對一株放線菌進(jìn)行種子培養(yǎng)基的優(yōu)化，看到有的文獻(xiàn)說指標(biāo)為菌絲生長量。我想問一下這個菌絲生長量是指穩(wěn)定期的菌絲量嗎？是不是穩(wěn)定期的菌絲量比較大，在一定的程度上也表明對數(shù)期的生長速率比較快？ |
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2樓2011-07-07 09:58:35
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3樓2011-07-07 10:01:49
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4樓2011-07-07 10:08:31
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5樓2011-07-08 15:30:24
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6樓2011-07-08 15:33:24
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您好，我又重新看了您的帖子，并再思考了一下 1、您之前提到的說把種子液進(jìn)行培養(yǎng)，每隔N個小時后拿去進(jìn)行發(fā)酵，這就相當(dāng)于是在做種齡的實(shí)驗(yàn)了吧。 2、而我現(xiàn)在要做的是種子液培養(yǎng)基的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，那就相當(dāng)于只是改變培養(yǎng)基的成分，而所有其它的因素都先把它固定下來，包括種齡也要固定下來。 3、我現(xiàn)在還有幾個問題感到有點(diǎn)困惑，想要請教一下，我一開始把無菌水倒入斜面，制備孢子懸浮液，這個無菌水的量應(yīng)該是多少，怎么來確定呢?完了之后，我再按照一定的比例接入有不同比例的種子培養(yǎng)基中。到了這一步后，我看了許多的文獻(xiàn)，文獻(xiàn)上都有確定的時間，比例說培養(yǎng)了20小時，或是12小時的，完了之后再進(jìn)行發(fā)酵。我想問這個時間他們是怎么確定的？是之前已經(jīng)做了生長曲線，知道在相同的條件下這個時間段是對數(shù)期嗎？ 謝謝！ |
7樓2011-07-12 21:39:35
iaminxanadu
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander(金幣+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
rainwander(金幣+5, EPI+1): 2011-07-13 16:01:36
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首先回答一下孢子懸液的問題。 工業(yè)上一般制作孢子都是用裝液量是100ml茄形瓶來做，最后等孢子成熟后加50ml甘油水或DMSO（20%），刮下玻璃珠振蕩，分裝1~1.5ml。保存。 實(shí)驗(yàn)室里9厘米的平板，20ml...... 這也只是一個習(xí)慣做法，不是每種防線菌都一定要這樣。但要保證孢子濃度，一般不低于10^9ml^-1 再來說一下原來的問題。 種子的培養(yǎng)基優(yōu)化也好、種齡也好，本質(zhì)上是相聯(lián)系的。不能單純的拿一個指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化，即便你看到某些文獻(xiàn)這樣做了，那是為了研究影響因素。 你固定了種齡去優(yōu)化培養(yǎng)基時，會得到較優(yōu)的結(jié)果，但這里面可能存在遺漏。 比如說，你固定在35小時。開始實(shí)驗(yàn)：第一組配方A1+B2+C3+D4，第二組A2+B3+C4+D1.......，你得出了第一組結(jié)果最好。但很可能你要是延長或縮短了種齡，第二組的結(jié)果會更好。 所以，要看發(fā)酵結(jié)果來反推哪個培養(yǎng)基，哪個時間的培養(yǎng)基最佳。 不知道，我說的清楚不？  |
8樓2011-07-13 09:11:31
iaminxanadu
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【答案】應(yīng)助回帖
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rainwander(金幣+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
rainwander(金幣+3, EPI+1): 2011-07-13 16:01:51
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還有個問題剛看到。關(guān)于種齡的確定。 文獻(xiàn)上的時間，當(dāng)然是通過大量實(shí)驗(yàn)摸索的啊。 并且不是通過生長曲線來確定的。生長曲線很明確的分了幾個階段，對數(shù)生長期來說，也不是一個點(diǎn)，是一段時間，那么怎么種齡的時間一般都說成一個點(diǎn)：比如培養(yǎng)24小時，或培養(yǎng)36小時，但很少說培養(yǎng)20~24小時。即便有，那也是通過實(shí)驗(yàn)知道了這段時間都行（影響不大），或者是一種估測，或者是為了保密。 前階段我發(fā)了個相關(guān)的帖子，忘了在哪了。總之，生長曲線的不是那么重要，重要的是看種子的狀態(tài)，生理狀態(tài)的“好壞”，要看對發(fā)酵結(jié)果的影響。 一個種子培養(yǎng)基里都是葡萄糖，長的沒的說，本來28小時成熟，現(xiàn)在呢14小時OK了，敢用嗎？ 剛開始的回帖中，我說的就是這個意思。14小時的種子也長夠了，但生理狀態(tài)呢？微觀上的基因表達(dá)呢？是不是培養(yǎng)過程中淀粉利用相關(guān)的酶類轉(zhuǎn)錄表達(dá)過程變化了？會不會影響下游發(fā)酵？會不會富集了那些懶漢？到發(fā)酵培養(yǎng)里誰干活？怎么產(chǎn)出？ 首先得知道種子培養(yǎng)的目的是什么？ 種子培養(yǎng)就是為發(fā)酵做準(zhǔn)備。這種準(zhǔn)備既是量上的準(zhǔn)備，也是質(zhì)上的準(zhǔn)備。配方也是作為一種過渡。即在一定時間內(nèi)獲得一定生理狀態(tài)的菌體。 為什么看起來這么糾結(jié)呢？因?yàn)�，我們還沒有透徹的了解這個過程，這個過程的關(guān)鍵點(diǎn)是什么不知道，所以不能只看種齡。 |
9樓2011-07-13 09:34:05
xiaohong88
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10樓2011-07-13 11:04:42
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