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活動(dòng)【xxx的一天】---歡迎大家積極參與
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×××的一天 【活動(dòng)宗旨】：本次活動(dòng)旨在鼓勵(lì)大家分享實(shí)驗(yàn)過程中的心得體會(huì)，使得后來人能夠注意到具體實(shí)驗(yàn)過程中一些小而重要的事項(xiàng)，少走彎路。 【活動(dòng)發(fā)起人】: 生物版全體版主及專家顧問 【活動(dòng)內(nèi)容】： 生物總版所有成員都可以以“【活動(dòng)】×××的一天”為主題發(fā)帖，字?jǐn)?shù)不少于200字，所發(fā)主題帖將列入活動(dòng)范圍，并根據(jù)其詳盡程度及廣大蟲友的好評獲得金幣獎(jiǎng)勵(lì)。最后，所有的主題帖將被結(jié)集刊出并分享給論壇所有蟲友。 【活動(dòng)規(guī)則】： 1) 所發(fā)主題帖必須是關(guān)于具體的某個(gè)生物實(shí)驗(yàn)過程，如蛋白純化、Southern、Western、Chip，Microarray 等； 2) 帖子內(nèi)容應(yīng)盡可能詳盡，步驟條理明確，括號(hào)中注明注意事項(xiàng)并做出合理解釋； 3) 所有主題帖都將由蟲友監(jiān)督，謝絕粘貼復(fù)制，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，將不被納入活動(dòng)范圍； 4) 最終納入結(jié)集的主題帖都將得到豐厚的金幣獎(jiǎng)勵(lì)，具體數(shù)額待定。 【活動(dòng)時(shí)間】： 2011-7-8至2011-8-31 |
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Elispot的一天 1. 用100ul 70%酒精孵育PVDF孔板，室溫下孵育10分鐘。 2. 倒去酒精，用100ul PBS洗滌3次。 3. 3.將100ul捕獲抗體加入10ml PBS中，混合，每孔加100ul， 蓋上板蓋，4℃過夜。 4.倒去液體，100ul PBS洗滌一次。 5.每孔加入100ul 2%脫脂乳PBS，蓋上板蓋，室溫下孵育2小時(shí)。 6.在水槽邊和吸水紙上輕打，倒去液體。 7.用100ul PBS洗滌一次。 8.每孔加入100ul細(xì)胞懸浮液（含適當(dāng)量的細(xì)胞和相應(yīng)濃度的刺激劑）。細(xì)胞可預(yù)先在體外接受刺激（間接Eli-spot）。蓋上標(biāo)準(zhǔn)的96孔板塑料板蓋，37℃ CO2孵育箱中孵育一定的時(shí)間（15-20小時(shí)）。這期間不要晃動(dòng)或移動(dòng)孔板。 9.在水槽邊和吸水紙上輕打，倒去液體。 10.每孔加100ul洗滌緩沖液，4℃孵育10分鐘。 11.用100ul洗滌緩沖液洗孔3次。 12.于10ml PBS-1%BSA中稀釋100ul檢測抗體，此為一板的量。每孔加100ul此液體，蓋上板蓋，37℃下孵育1小時(shí)30分。 13.倒去液體，用100ul洗滌緩沖液洗3次。 14.每板以10ml PBS-1%BSA稀釋10ul的親和素堿性磷酸酶。每孔加入100ul此液體，蓋上板蓋，37℃孵育1小時(shí)。 15.倒去液體，用100ul洗滌緩沖液洗3次。在吸水紙上拍打，吸干殘留的洗滌液。 16.每孔加入100ul BCIP/NBT。 17.室溫下反應(yīng)5-15分鐘。完全顯色后，將此液倒于相應(yīng)的盤中。 18.用蒸餾水充分洗滌膜的兩邊。吸水紙上輕拍，使膜干燥。保存時(shí)，將板倒置以免殘留的液體流回膜上一旦膜干燥后，讀取點(diǎn)數(shù)。4℃下放置一夜，點(diǎn)會(huì)比較明顯。 此板在室溫下避光保存。 使用時(shí)應(yīng)注意BCIP/NBT緩沖液是潛在的至癌物質(zhì)，試驗(yàn)時(shí)帶手套，使用后適當(dāng)處理。 [ Last edited by winzhouyun on 2011-7-9 at 10:22 ] |
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