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大米小麥新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于PAL苯丙氨酸解氨酶活性測(cè)定的試驗(yàn)
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| 在測(cè)定竹筍的PAL苯丙氨酸解氨酶活性的試驗(yàn)中，對(duì)照應(yīng)該怎么做？是用煮過失活的酶液還是用沒煮的？我在試驗(yàn)時(shí)用的是煮過失活的，師兄說是用沒煮的，沒煮的酶液做對(duì)照時(shí)，自動(dòng)調(diào)零跳動(dòng)的很厲害（用分光光度計(jì)測(cè)定時(shí)）。到底怎么回事？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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咸魚(金幣+5, EPI+1): good~ 2011-07-15 13:07:05
大米小麥(金幣+1): 2011-08-02 08:59:33
咸魚(金幣+5, EPI+1): good~ 2011-07-15 13:07:05
大米小麥(金幣+1): 2011-08-02 08:59:33
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PAL的提取與活性的測(cè)定 按照Lister等的方法[19]并略有改進(jìn). 0.5 g甘薯材料加入5 mL的提取液[0•2 M硼酸鹽緩沖液(pH8.8), 0.018 Mβ-巰基乙醇], 0.1 g PVPP(以去除酚類物質(zhì)對(duì)顏色的干擾),加少量石英砂,于-20℃預(yù)冷的研缽中冰浴研磨, 4層紗布過濾.濾液經(jīng)4℃, 15 000 g離心20 min,取上清液作為粗酶液,用于PAL活性測(cè)定. 取1 mL粗酶液加2 mL蒸餾水再加1 mL反應(yīng)底物(0•02 M的L-苯丙氨酸),對(duì)照不加底物,加1mL蒸餾水. 34℃恒溫水浴30 min, 加0.5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)終止反應(yīng). 12 000 g離心10 min去除變性蛋白,于290 nm波長處測(cè)定吸光度. 以1 mL反應(yīng)液每小時(shí)在290 nm處吸光度變化0.01為1個(gè)酶活單位, 用U表示 ----- Li YP. The correlation between anthoeyanidin accumulation and activities of enzymes involved in anthoeyanidin biosynthesis in puple-fleshed sweetpotato[Ipomoea batatas(L.)Lam.][D]. Southwest University, 2010.(in chinese) ----Lister CE, Lancaster JE. Developmental changes in enzymes of flavonoid biosynthesis in the skins of ted and green apple cultivars [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 1996, 71: 313-320. |
2樓2011-07-15 10:00:34
3樓2011-07-15 10:02:06
努力超人
新蟲 (初入文壇)
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4樓2013-07-31 22:25:42
hkqgeoffrey
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5樓2013-08-03 15:30:42
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