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yun880305t新蟲 (初入文壇)
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[求助]
跪求指點HPR與TMB的顯色反應(yīng)
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本人最近在做HPR與TMB的顯色反應(yīng)實驗，開始按照JACS上一篇文章配置TMB工作液（TMB用DMSO配成1mg/ml，然后與0.1M檸檬酸、0.2M Na2HPO4的混合溶液按1：9混和），這之后直接就出現(xiàn)了藍色沉淀。然后第二次在網(wǎng)上尋求別人幫助找到一個TMB工作液配置方法（A液：Na2Ac 13.6g，檸檬酸1.6g，30%雙氧水0.3ml，蒸餾水加至500ml。 B液：EDTA Na2 0.2g，檸檬酸0.95g，甘油50ml，取0.15gTMB溶于3mlDMSO中，蒸餾水加至500ml。使用時去A B等體積混合），這一方法發(fā)現(xiàn)當(dāng)我直接用HEMIN與TMB工作液混合時，直接就變成了淺藍色溶液（沒有沉淀）。跪求哪位高手指點迷津，并且好心透漏下您親自驗證過的TMB工作液配置方法，感激不盡。 注：本人是化學(xué)專業(yè)的，做的并不是ELISA檢驗，只是需要TMB的顯色信號。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
dhd997(金幣+3, EPI+1): 一并獎勵，歡迎交流 2011-07-15 10:35:50
yun880305t(金幣+5): 謝謝您的耐心解答，第一次碰DNA酶就遇到這問題 以后有陰影了~o~！ 2011-07-15 19:44:39
dhd997(金幣+3, EPI+1): 一并獎勵，歡迎交流 2011-07-15 10:35:50
yun880305t(金幣+5): 謝謝您的耐心解答，第一次碰DNA酶就遇到這問題 以后有陰影了~o~！ 2011-07-15 19:44:39
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呵呵，金幣無所謂了。而且看了你后面的補充描述，我有點質(zhì)疑我之前的看法了。一個一個說吧。 1、在沒有HRP存在的情況下，TMB可以被緩慢的氧化而逐漸呈色，但這個過程耗時挺長的，所以樓主說AB液混合后立即就顯色并且有沉淀，我才懷疑是HRP污染了。 2、但后面你說的“直接用TMB的DMSO溶液加入Na2HPO4溶液也直接出現(xiàn)了藍色沉淀”就比較奇怪了，因為即使TMB被HRP污染，但在無氧化劑的情況下，是不應(yīng)該會有反應(yīng)的。所以我也想不明白為什么會這樣了。 3、配置溶液的容器主要是要干凈，用超純水多洗幾遍。如果不涉及到生產(chǎn)，是否滅菌倒是無所謂。 |
4樓2011-07-15 10:15:52
2樓2011-07-14 14:03:54
yun880305t
新蟲 (初入文壇)
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5樓2013-05-13 11:30:42
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