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zxzhouwhu銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
MCF-10A細(xì)胞消化問(wèn)題請(qǐng)教，謝謝！
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| 培養(yǎng)人正常乳腺細(xì)胞MCF-10A，發(fā)現(xiàn)非常難消化下來(lái)，我用的是胰酶+EDTA的消化液，都消化快30分鐘啦，還是吹大不下來(lái)，不知道大家有養(yǎng)過(guò)這個(gè)細(xì)胞的沒(méi)有，有什么經(jīng)驗(yàn)？非常感謝，急切等待大家回復(fù)！ |
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yuandian114
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3樓2011-07-16 19:20:58
dhd997
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2樓2011-07-16 18:54:13
lw582482481
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金幣+4): 2011-08-04 11:01:31
amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金幣+4): 2011-08-04 11:01:31
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關(guān)于細(xì)胞消化的問(wèn)題： 1.胰酶一般是在37度預(yù)熱，這樣消化效果比較好 2. 對(duì)于比較好消化的細(xì)胞以及貼壁容易掉落的細(xì)胞如293t之類的，胰酶可以預(yù)熱或者不預(yù)熱都可以，一般很快就可以消化下來(lái)，而且這類細(xì)胞消化時(shí)間不宜長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞自身不好。一般是通過(guò)吹打使細(xì)胞分散成單個(gè)的。 3.對(duì)于較難消化的細(xì)胞，例如一般的上皮細(xì)胞（hela，L02，COS）之類的，我一般是采用棄掉培養(yǎng)基之后，小加入少量的胰酶，預(yù)消化一次，大約幾十秒吧，然后吸掉（這個(gè)是為了預(yù)消化的同時(shí)去掉未吸干凈的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基對(duì)于胰酶的消化有抑制作用），再加入新的胰酶（預(yù)熱好的），2-3分鐘即可。 4 對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，你可以直接將預(yù)熱的培養(yǎng)基加入細(xì)胞之中，并且在37度消化，你自己注意時(shí)間，別太過(guò)了，很容易過(guò)頭。這個(gè)是我們之前培養(yǎng)MDCK這種十分緊密的上皮細(xì)胞采取的辦法。 對(duì)于你的MCF-10a ，沒(méi)有養(yǎng)過(guò)。你可以采取較難消化的那種，實(shí)在不行的話你就在37度消化吧。 此外，個(gè)人認(rèn)為將胰酶預(yù)熱至37度是極為重要的。因?yàn)槲覀儽４嬉让甘窃?度，胰酶消化的合適溫度為37度 |
4樓2011-07-16 22:12:57
nagasaki
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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5樓2011-07-18 09:36:20
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