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zxzhouwhu銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
MCF-10A細胞消化問題請教，謝謝！
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| 培養(yǎng)人正常乳腺細胞MCF-10A，發(fā)現(xiàn)非常難消化下來，我用的是胰酶+EDTA的消化液，都消化快30分鐘啦，還是吹大不下來，不知道大家有養(yǎng)過這個細胞的沒有，有什么經(jīng)驗？非常感謝，急切等待大家回復！ |
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lw582482481
銅蟲 (初入文壇)
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵應助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金幣+4): 2011-08-04 11:01:31
amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵應助 2011-07-17 19:12:30
zxzhouwhu(金幣+4): 2011-08-04 11:01:31
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關于細胞消化的問題： 1.胰酶一般是在37度預熱，這樣消化效果比較好 2. 對于比較好消化的細胞以及貼壁容易掉落的細胞如293t之類的，胰酶可以預熱或者不預熱都可以，一般很快就可以消化下來，而且這類細胞消化時間不宜長，對細胞自身不好。一般是通過吹打使細胞分散成單個的。 3.對于較難消化的細胞，例如一般的上皮細胞（hela，L02，COS）之類的，我一般是采用棄掉培養(yǎng)基之后，小加入少量的胰酶，預消化一次，大約幾十秒吧，然后吸掉（這個是為了預消化的同時去掉未吸干凈的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基對于胰酶的消化有抑制作用），再加入新的胰酶（預熱好的），2-3分鐘即可。 4 對于特別難消化的細胞，你可以直接將預熱的培養(yǎng)基加入細胞之中，并且在37度消化，你自己注意時間，別太過了，很容易過頭。這個是我們之前培養(yǎng)MDCK這種十分緊密的上皮細胞采取的辦法。 對于你的MCF-10a ，沒有養(yǎng)過。你可以采取較難消化的那種，實在不行的話你就在37度消化吧。 此外，個人認為將胰酶預熱至37度是極為重要的。因為我們保存胰酶是在4度，胰酶消化的合適溫度為37度 |
4樓2011-07-16 22:12:57
dhd997
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3樓2011-07-16 19:20:58
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