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[求助]
關(guān)于cyt C問題
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我現(xiàn)在要做cyt C 的western ，買的抗體型號(hào)是SC-13156，請(qǐng)問有人用這個(gè)抗體么？怎么樣？我要做這個(gè)，蛋白預(yù)染marker要買多大的？就是要根據(jù)cyt C的蛋白大小而定。還有就是做cyt C一抗的稀釋度是多少？請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的前輩高手指�。� [ Last edited by 癟 on 2011-7-18 at 20:38 ] |
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2樓2011-07-19 09:31:38
還是沒人知道，頂一下~ 3樓2011-07-20 12:21:28
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4樓2011-07-20 16:20:19
5樓2011-07-22 09:08:08
6樓2011-07-22 09:20:05
西瓜
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7樓2011-07-22 09:28:32
8樓2011-07-22 09:49:53
9樓2011-07-26 08:08:58
rb
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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應(yīng)該用Tricine-SDS-PAGE來電泳，普通的變性膠很難分離小分子量的蛋白質(zhì)；凝膠的濃度為16.5％T和3％C就差不多；最關(guān)鍵的一步是轉(zhuǎn)移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定，否則在經(jīng)過后續(xù)處理后小分子量的蛋白質(zhì)基本上被洗脫或者擴(kuò)散了，我們通常是在轉(zhuǎn)移完畢后，先用超純水漂洗一下膜，然后在TBS中過渡清洗5分鐘左右，然后用含0.2％戊二醛的TBS固定45分鐘，再依照WB的步驟處理后面的過程，后來能得到很好的結(jié)果，否則明明蛋白轉(zhuǎn)移到膜上了，后來卻消失不見，更不用說免疫檢測(cè)了. 轉(zhuǎn)自丁香園smjxc |
10樓2011-07-26 09:03:34
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