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關(guān)于cyt C問(wèn)題
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我現(xiàn)在要做cyt C 的western ，買的抗體型號(hào)是SC-13156，請(qǐng)問(wèn)有人用這個(gè)抗體么？怎么樣？我要做這個(gè)，蛋白預(yù)染marker要買多大的？就是要根據(jù)cyt C的蛋白大小而定。還有就是做cyt C一抗的稀釋度是多少？請(qǐng)有經(jīng)驗(yàn)的前輩高手指��！ [ Last edited by 癟 on 2011-7-18 at 20:38 ] |
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rb
木蟲(chóng) (著名寫手)
小笨蟲(chóng)蟲(chóng)
- 應(yīng)助: 44 (小學(xué)生)
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- 專業(yè): 人類遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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應(yīng)該用Tricine-SDS-PAGE來(lái)電泳，普通的變性膠很難分離小分子量的蛋白質(zhì)；凝膠的濃度為16.5％T和3％C就差不多；最關(guān)鍵的一步是轉(zhuǎn)移后你的PVDF膜一定要在固定液中固定，否則在經(jīng)過(guò)后續(xù)處理后小分子量的蛋白質(zhì)基本上被洗脫或者擴(kuò)散了，我們通常是在轉(zhuǎn)移完畢后，先用超純水漂洗一下膜，然后在TBS中過(guò)渡清洗5分鐘左右，然后用含0.2％戊二醛的TBS固定45分鐘，再依照WB的步驟處理后面的過(guò)程，后來(lái)能得到很好的結(jié)果，否則明明蛋白轉(zhuǎn)移到膜上了，后來(lái)卻消失不見(jiàn)，更不用說(shuō)免疫檢測(cè)了. 轉(zhuǎn)自丁香園smjxc |
10樓2011-07-26 09:03:34
2樓2011-07-19 09:31:38
還是沒(méi)人知道，頂一下~ 3樓2011-07-20 12:21:28
5樓2011-07-22 09:08:08
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