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[求助]
關(guān)于cyt C問題
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我現(xiàn)在要做cyt C 的western ，買的抗體型號是SC-13156，請問有人用這個抗體么？怎么樣？我要做這個，蛋白預染marker要買多大的？就是要根據(jù)cyt C的蛋白大小而定。還有就是做cyt C一抗的稀釋度是多少？請有經(jīng)驗的前輩高手指��！ [ Last edited by 癟 on 2011-7-18 at 20:38 ] |
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xiaolangzzy
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- 專業(yè): 生物化學
【答案】應助回帖
癟(金幣+5): 2011-07-27 08:26:10
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根據(jù)我的經(jīng)驗，細胞色素c (cyt c)的分子量約為12kd，能夠通過15%的SDS-PAGE較好地分離開，但是應注意染料條帶不能跑過距離膠底1/3處，而且蛋白電轉(zhuǎn)的時間不能太長（我用的是PVDF膜，方法為全濕法電轉(zhuǎn)，條件為350mA，2h）。 santa的抗體雖然大部分不好用，但是cyt c的抗體還是比較好用的，稀釋度記不清了，應該是1:1000吧。 我當時沒有用預染的Marker，你若需要的話就買中分子量范圍的就可以的。關(guān)鍵是在預實驗的時候需要同時做一個陽性對照（購買的提純的cyt c），不同物種的cyt c是非常保守相似的，所以不用擔心抗體和購買的提出cyt c不合適的問題。 希望對你有幫助，祝好運！ |
11樓2011-07-26 16:03:04
2樓2011-07-19 09:31:38
還是沒人知道，頂一下~ 3樓2011-07-20 12:21:28
5樓2011-07-22 09:08:08
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