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[交流]
關于基因工程藥物在CHO細胞中的表達問題
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戰(zhàn)友們，大家好！小弟想做基因工程藥物在CHO細胞中的大規(guī)模表達培養(yǎng)。有以下幾個問題： 1.關于外源基因轉入CHO細胞：我想問問載體的選擇對于后面的表達量影響大么，不同的載體會造成表達量的巨大差異么？？（如果哪位戰(zhàn)友做過這方面的工作并獲得較大產(chǎn)量，那么你們用什么載體呢？）還有就是轉染策略：是選擇貼壁細胞轉染、篩選成功之后再馴化成懸浮培養(yǎng)還是直接用CHO的懸浮細胞轉染呢？另外，采用哪種方法轉染效率高并且利用篩選到轉入目標質粒的陽性細胞株呢？ 2.有什么方法可以克服懸浮之后的細胞成團問題，也就是說能夠實現(xiàn)細胞的高密度、不結團的大量表達么？？ 3.有木有自制的無血清培養(yǎng)基？自制培養(yǎng)基需要考慮哪些加入物質？ |
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2樓2011-10-28 09:44:43
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wahaha9115(金幣+1): 2012-02-21 17:27:21
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
wahaha9115(金幣+1): 2012-02-21 17:27:21
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穩(wěn)定表達對基因載體的要求不高，關鍵是看你基因插入的位點。市場上有定點整合的質粒載體，可以使你的基因整合到轉錄頻率高的地方。 一般是先轉染，然后篩選，馴化為無血清懸浮培養(yǎng)。 如果細胞懸浮培養(yǎng)時持久地結團，可在生長液中加入50μg/ml 的胰 蛋白酶；3,5個細胞成團沒事！ 實現(xiàn)高產(chǎn)量表達，細胞株和細胞密度是兩個關鍵因素。多篩幾株備用，細胞密度主要的影響還是培養(yǎng)基等。 自制培養(yǎng)基可以，不過沒有幾年的功夫拿不下來。 把上面的問題都搞透了，沒有三兩年的功夫不好弄。加油！ |
3樓2011-10-28 14:51:44
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