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wxy1234yyf金蟲 (小有名氣)
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| 各位師兄師姐,實(shí)驗中遇到個詭異的問題想請教下:目的基因連T載體,PCR帶很亮,酶切檢驗卻看不到條帶,連質(zhì)粒都看不到,怎么回事呢? |
【分子生物】EPI帖 |
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
限制人

專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
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專家經(jīng)驗: +57 |
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樓主說的太不明確了,PCR條帶很亮是指做PCR驗證的時候嗎?還是你原來連接之前PCR目的基因很亮呢? 你有沒有提取重組質(zhì)粒呢? 一般驗證連接的話: 1:先做一個PCR,如果可以P出來,那么很有可能就對了; 2:然后提取重組質(zhì)粒,電泳驗證,點(diǎn)樣的時候可以順便點(diǎn)一個空載體當(dāng)對照,如果重組載體比空載體大一點(diǎn)的話,那就對了,當(dāng)然了,這個取決于目的基因的大小了,如果是幾十bp或者是100bp等小片段的話,就不太好看出來了,此時就需要進(jìn)行一個酶切驗證了; 3:酶切重組載體,照樓主所說,你酶切看不到條帶,首先保證你重組質(zhì)粒提取出來了,其次有可能是你酶切體系太小了,導(dǎo)致看不到;當(dāng)然了膠也有可能有問題的; 祝好運(yùn)! |

金蟲 (小有名氣)
金蟲 (正式寫手)

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