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wxy1234yyf金蟲 (小有名氣)
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一個問題 已有3人參與
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| 各位師兄師姐，實(shí)驗(yàn)中遇到個詭異的問題想請教下：目的基因連T載體，PCR帶很亮，酶切檢驗(yàn)卻看不到條帶，連質(zhì)粒都看不到，怎么回事呢？ |
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2樓2011-07-22 17:43:20
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-07-22 19:15:47
小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
amisking(金幣+4, EPI+1): 鼓勵應(yīng)助 2011-07-22 19:15:47
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樓主說的太不明確了，PCR條帶很亮是指做PCR驗(yàn)證的時候嗎？還是你原來連接之前PCR目的基因很亮呢？ 你有沒有提取重組質(zhì)粒呢？ 一般驗(yàn)證連接的話： 1：先做一個PCR，如果可以P出來，那么很有可能就對了； 2：然后提取重組質(zhì)粒，電泳驗(yàn)證，點(diǎn)樣的時候可以順便點(diǎn)一個空載體當(dāng)對照，如果重組載體比空載體大一點(diǎn)的話，那就對了，當(dāng)然了，這個取決于目的基因的大小了，如果是幾十bp或者是100bp等小片段的話，就不太好看出來了，此時就需要進(jìn)行一個酶切驗(yàn)證了； 3：酶切重組載體，照樓主所說，你酶切看不到條帶，首先保證你重組質(zhì)粒提取出來了，其次有可能是你酶切體系太小了，導(dǎo)致看不到；當(dāng)然了膠也有可能有問題的； 祝好運(yùn)！ |
3樓2011-07-22 18:48:55
wxy1234yyf
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4樓2011-07-22 19:03:33
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5樓2011-07-22 20:23:38
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