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親愛(ài)的文妞新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
大腸桿菌DH5a和XL1-Blue之間如何區(qū)分
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想請(qǐng)教各位高手，大腸桿菌DH5a和XL1-Blue之間如何區(qū)分？？如果兩種菌弄混了怎么區(qū)別開(kāi)？ 感受態(tài)細(xì)胞容易失活嗎？在什么情況下比較容易失活？ 謝謝各位~~ [ Last edited by 1949stone on 2011-7-25 at 02:53 ] |
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2樓2011-07-23 20:30:57
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3樓2011-07-23 20:36:54
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5): 辛苦 2011-07-24 09:12:29
親愛(ài)的文妞(金幣+4): 好的，謝謝~~辛苦啦，嘿嘿~~ 2011-07-24 12:10:27
dhd997(金幣+5): 辛苦 2011-07-24 09:12:29
親愛(ài)的文妞(金幣+4): 好的，謝謝~~辛苦啦，嘿嘿~~ 2011-07-24 12:10:27
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DH5a不帶任何抗性，XL1-Blue具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性，可以用抗性把它們區(qū)分開(kāi)。 感受態(tài)細(xì)胞做好之后凍在-80℃，解凍了就要用了，不然再凍起來(lái)效率也已經(jīng)不行了。 下面的資料是網(wǎng)上找來(lái)的： 常用感受態(tài)細(xì)胞的基因型和區(qū)別 Xl1-Blue菌株 基因型： endA1 gyrA96（nalR） thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F'[Tn10 proAB+ lacIq Δ（lacZ）M15] hsdR17（rK- mK+）。 特點(diǎn)： 具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。 用途： 分子克隆和質(zhì)粒提取。 BL21（DE3）菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5）。 特點(diǎn)： 該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達(dá)受控于λ噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動(dòng)子，該區(qū)整合于 BL21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達(dá)。 用途： 蛋白質(zhì)表達(dá)。 BL21（DE3）ply菌株 基因型： F- ompT gal dcm lon hsdSB（rB- mB-） λ（DE3） pLysS（cmR）。 特點(diǎn)： 該菌株帶有pLysS,具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。 適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)。 用途： 蛋白質(zhì)表達(dá)。 DH5α菌株 基因型： F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ（lacZYA-argF）U169, hsdR17（rK-, λ-）。 特點(diǎn)： 一種常用于質(zhì)�？寺〉木�。 其Φ80dlacZΔM15基因的表達(dá)產(chǎn)物與pUC載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和 endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。 用途： 分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。 JM109菌株 基因型： endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ（lac-proAB） e14- [F' traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17（rK-mK+）。 特點(diǎn)： 部分抗性缺陷，適合重復(fù)基因表達(dá)， 可用于M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩選。 用途： 分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。 |
4樓2011-07-23 21:02:26
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