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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 關于質粒單酶切
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liuwei78銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關于質粒單酶切
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| 若是所提質粒濃度較低，用來單酶切或雙酶切時要注意些什么么？我酶切完以后還要切膠回收的。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 22:47:34
liuwei78(金幣+5): 2011-07-31 08:59:20
西瓜(金幣+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 22:47:34
liuwei78(金幣+5): 2011-07-31 08:59:20
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如果質粒濃度太低的話做酶切也可以，但是為什么樓主不想一下為什么質粒濃度提取出來濃度會低呢？當然了，這跟宿主菌和提質粒的步驟有很大關系； 濃度太低的話，載體可以多添加一些，酶切體積也可以大一些；當然了這要看你做酶切驗證還是以后做下游工作，如果做酶切驗證，20ul體系，30ul體系都可以做的；如果要進行下游工作的話，標準體系是50ul，也已大一些，這個視你質粒的多少了； 酶切完以后先電泳看看是否完全切開，然后再進行純化，不然很影響下游工作，比如連接。。。酶切完終體積應該小一些，50ul的酶切體系可以濃縮到20或者30ul，這樣便于后期工作。。。 祝好運！ |
2樓2011-07-30 17:19:25
3樓2013-04-10 16:18:47
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