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wanghuiling新蟲 (正式寫手)
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[求助]
新 C18的使用
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| 新C18柱子該注意什么呢？流動相是2%乙腈，用磷酸緩沖液調(diào)制pH2的混合液。第一次使用這根C18柱，尋求洗脫方法，謝謝~ |
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【答案】應(yīng)助回帖
wanghuiling(金幣+8, 博學(xué)EPI+1): 謝謝，是不是一定要按這個比例沖洗柱子呢？后期的55%甲醇沖半小時可不可以不做。直接用純甲醇沖了？ 2011-08-03 11:30:39
wanghuiling(金幣+2): 2011-08-12 09:07:51
wanghuiling(金幣+2): 2011-08-12 09:07:51
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1、新柱的處理：我們每次新買的柱子雖然是經(jīng)廠家測試過并密封好 的，可是有的柱子到達手中時已經(jīng)過很長的時間了，因此，我們每拿 到一根新的色譜柱都必須要對柱子進行處理。首先，是配制好 65% 的乙腈/水，再把色譜柱正確的連接在色譜儀上，出口放空（注意： 出口端切不可連上檢測器，以免污染了檢測器） 以低流速 ， 0.1ml/min~0.5ml/min（如果是 LC/MC 柱子，則應(yīng)以 0.3 ml/min 進行） 均可，不可以高流速進行，等看見柱子出口有液體流出后，過 20 分 鐘后再接上檢測器，以循序漸進的方法將流速調(diào)至 1.0ml/min（如果 是 LC/MC 柱子則應(yīng)以 0.3 ml/min 進行），繼續(xù)沖洗 2~8 小時。 2、新柱的使用：首先我們確認所分析樣品流動相的 PH 是不是在色 譜柱 PH 的耐受范圍之內(nèi)，以免損傷柱子!如果，確認在柱子的使用范 圍之內(nèi)，就用做樣品的流動相平衡柱子(如果流動相中含用緩沖鹽溶 液，在平衡柱子之前務(wù)必要先用 5%甲醇或 5%乙腈去過渡 30 分鐘以 上。再用帶鹽的流動相去平衡色譜柱。)當色譜柱平衡了足夠時間， 基線非常平穩(wěn)的時候，方可進樣分析。 3、色譜柱清洗：①如果樣品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的 流動相，在做完樣品之后可直接用 55%~65%乙腈/水或者用 55%~65% 甲醇/水沖洗色譜柱 40~80 分鐘，然后以純甲醇或乙腈沖洗 30 分鐘， 即可保存；②如果樣品分中流動相里含用緩沖液或酸或離子對試劑的 流動相，在做完樣品之后的清洗必須按照如下步驟進行清洗柱子:先 用 5%的甲醇/水或 5%的乙腈/水，以 1ml/min,沖洗 1.5 小時以上(如果 色譜柱更長， 則還需要增加適當時間);然后用 55%甲醇/~水 65%/水沖 洗色譜柱 30~60 分鐘.最后用甲醇或乙腈以 1ml蒸餾水/min 沖洗 30 分鐘。 備注：甲醇、乙腈要用色譜純。水用是重 |
2樓2011-08-01 15:15:47
dmsong
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3樓2011-08-03 15:36:42
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