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zouxy銅蟲(chóng) (小有名氣)
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蛋白質(zhì)固定吸附與蛋白質(zhì)分離純化的區(qū)別
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| 請(qǐng)問(wèn) 蛋白質(zhì)固定吸附與蛋白質(zhì)分離純化的區(qū)別是什么?有沒(méi)有相關(guān)的資料給傳一份呀?或者給深入 的講解一下吧!非常感謝! |

木蟲(chóng) (小有名氣)
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在基本原理上,固定吸附和基于固定吸附的分離純化(以離子色譜和親和色譜為例)都是通過(guò)蛋白質(zhì)與基質(zhì)的相互作用(電荷作用、配位作用等等)實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)與基質(zhì)的結(jié)合。 不同的地方在于,固定吸附的著眼點(diǎn)是如何在不損害蛋白質(zhì)活性的前提下盡可能強(qiáng)的將蛋白質(zhì)固定在基質(zhì)上;而分離純化的著眼點(diǎn)則在于如何利用不同蛋白質(zhì)對(duì)基質(zhì)結(jié)合強(qiáng)度的差別,實(shí)現(xiàn)不同蛋白質(zhì)組分的可逆分離,在于吸附和釋放。 以PHB(聚羥基丁酸酯)的應(yīng)用為例,最早人們發(fā)現(xiàn)Phasin蛋白能夠吸附在PHB上,所以開(kāi)發(fā)了直接利用PHB一步法固定化“Phasin-模式蛋白”融合蛋白的固定化方法,另一組人則利用這種固定化方法,進(jìn)一步在"Phasin-模式蛋白"之間加入內(nèi)含肽intein,通過(guò)誘導(dǎo)intein的斷裂實(shí)現(xiàn)模式蛋白的釋放從而達(dá)到純化的目的。這個(gè)例子其實(shí)就能夠很好的體現(xiàn)固定吸附和基于固定吸附的蛋白質(zhì)純化之間的關(guān)系。 |
木蟲(chóng) (小有名氣)
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附上兩篇文獻(xiàn) http://u.115.com/file/clv34amb# 2004-AEM-In_vivo_immobilization_of_fusion_proteins_on_bioplastics_by_the_novel_tag_BioF.pdf http://u.115.com/file/dnsmlbzd# 2005-Protein_Sci-Novel_and_economical_purification_of_recombinant_proteins_Intein-mediated_protein_purification_using_in_vivo_polyhydroxybutyrate_(PHB)_matrix_association.pdf |
銅蟲(chóng) (小有名氣)

木蟲(chóng) (小有名氣)
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至尊木蟲(chóng) (知名作家)
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蛋白質(zhì)固定吸附是蛋白質(zhì)分離純化的一種方式,蛋白的分離純化方法很多。 蛋白的分離純化主要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來(lái)除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來(lái)。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物中分離出來(lái)。 常用的蛋白分離純化方法包括:分子篩(蛋白分子量大小差異),離子交換柱和疏水柱(蛋白的帶電性質(zhì)差異)和親和層析等。下面簡(jiǎn)單的解釋一下這些方法的原理。 1) 離子交換色譜是基于蛋白與離子交換樹(shù)脂間的相互電荷作用,通過(guò)選擇不同的緩沖液,同一種蛋白既可以和陰離子交換樹(shù)脂(能結(jié)合帶負(fù)電荷的分子)結(jié)合,也可以和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂結(jié)合。 這是在所有的蛋白純化與濃縮方法中最有效方法。 2)親和層析是基于目的蛋白與固相化的配基特異結(jié)合而滯留,其他雜蛋白會(huì)流過(guò)柱子。你提到的蛋白質(zhì)固定吸附也屬于這一種。 3)疏水作用 層析蛋白是由疏水性和親水性氨基酸組成的。疏水性氨基酸位于蛋白空間結(jié)構(gòu)的中心部位,遠(yuǎn)離表面的水分子。親水性氨基酸殘基則位于蛋白表面。不同的蛋白疏水性不同,與疏水作用力大小也不同,通過(guò)逐漸降低緩沖液中鹽濃度沖洗柱子,在鹽濃度很低時(shí),蛋白恢復(fù)自然狀態(tài),疏水作用力減弱被洗脫出來(lái)。 4)排阻層析 也叫凝膠過(guò)濾或分子篩。排阻層析柱的填充顆粒是多孔的介質(zhì),柱中圍繞著顆粒所能容納的液體量叫流動(dòng)相,也稱(chēng)無(wú)效體積。太大的蛋白不能進(jìn)入顆粒的孔內(nèi),只能存在于無(wú)效體積的溶液中,將會(huì)最早從柱中洗脫出來(lái),對(duì)這部分蛋白無(wú)純化效果。由于各種蛋白的分子大小不同,擴(kuò)散進(jìn)入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異。大的蛋白分子會(huì)被先洗脫出來(lái),分子越小,洗脫出來(lái)的越晚。 希望對(duì)你有幫助! |
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