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zouxy銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白質(zhì)固定吸附與蛋白質(zhì)分離純化的區(qū)別
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| 請問 蛋白質(zhì)固定吸附與蛋白質(zhì)分離純化的區(qū)別是什么？有沒有相關(guān)的資料給傳一份呀？或者給深入 的講解一下吧！非常感謝！ |
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jinkui960
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金幣+8, BioEPI+1): 很好~ 2011-08-03 13:42:26
silicare(金幣+8, BioEPI+1): 很好~ 2011-08-03 13:42:26
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蛋白質(zhì)固定吸附是蛋白質(zhì)分離純化的一種方式，蛋白的分離純化方法很多。 蛋白的分離純化主要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物中分離出來。 常用的蛋白分離純化方法包括：分子篩（蛋白分子量大小差異），離子交換柱和疏水柱（蛋白的帶電性質(zhì)差異）和親和層析等。下面簡單的解釋一下這些方法的原理。 1） 離子交換色譜是基于蛋白與離子交換樹脂間的相互電荷作用，通過選擇不同的緩沖液，同一種蛋白既可以和陰離子交換樹脂（能結(jié)合帶負電荷的分子）結(jié)合，也可以和陽離子交換樹脂結(jié)合。 這是在所有的蛋白純化與濃縮方法中最有效方法。 2）親和層析是基于目的蛋白與固相化的配基特異結(jié)合而滯留，其他雜蛋白會流過柱子。你提到的蛋白質(zhì)固定吸附也屬于這一種。 3）疏水作用 層析蛋白是由疏水性和親水性氨基酸組成的。疏水性氨基酸位于蛋白空間結(jié)構(gòu)的中心部位，遠離表面的水分子。親水性氨基酸殘基則位于蛋白表面。不同的蛋白疏水性不同，與疏水作用力大小也不同，通過逐漸降低緩沖液中鹽濃度沖洗柱子，在鹽濃度很低時，蛋白恢復(fù)自然狀態(tài)，疏水作用力減弱被洗脫出來。 4）排阻層析 也叫凝膠過濾或分子篩。排阻層析柱的填充顆粒是多孔的介質(zhì)，柱中圍繞著顆粒所能容納的液體量叫流動相，也稱無效體積。太大的蛋白不能進入顆粒的孔內(nèi)，只能存在于無效體積的溶液中，將會最早從柱中洗脫出來，對這部分蛋白無純化效果。由于各種蛋白的分子大小不同，擴散進入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異。大的蛋白分子會被先洗脫出來，分子越小，洗脫出來的越晚。 希望對你有幫助！ |
7樓2011-08-03 12:53:55
imfly77
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
adslye(金幣+10): 感謝您認真的應(yīng)助，非常專業(yè)，可否整理到一起我可以準備發(fā)EPI。祝順利~ 2011-08-03 13:23:32
silicare(BioEPI+1): 2011-08-03 14:15:56
zouxy(金幣+8): 感謝 2011-08-10 11:41:35
adslye(金幣+10): 感謝您認真的應(yīng)助，非常專業(yè)，可否整理到一起我可以準備發(fā)EPI。祝順利~ 2011-08-03 13:23:32
silicare(BioEPI+1): 2011-08-03 14:15:56
zouxy(金幣+8): 感謝 2011-08-10 11:41:35
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在基本原理上，固定吸附和基于固定吸附的分離純化（以離子色譜和親和色譜為例）都是通過蛋白質(zhì)與基質(zhì)的相互作用（電荷作用、配位作用等等）實現(xiàn)蛋白質(zhì)與基質(zhì)的結(jié)合。 不同的地方在于，固定吸附的著眼點是如何在不損害蛋白質(zhì)活性的前提下盡可能強的將蛋白質(zhì)固定在基質(zhì)上；而分離純化的著眼點則在于如何利用不同蛋白質(zhì)對基質(zhì)結(jié)合強度的差別，實現(xiàn)不同蛋白質(zhì)組分的可逆分離，在于吸附和釋放。 以PHB（聚羥基丁酸酯）的應(yīng)用為例，最早人們發(fā)現(xiàn)Phasin蛋白能夠吸附在PHB上，所以開發(fā)了直接利用PHB一步法固定化“Phasin-模式蛋白”融合蛋白的固定化方法，另一組人則利用這種固定化方法，進一步在"Phasin-模式蛋白"之間加入內(nèi)含肽intein，通過誘導(dǎo)intein的斷裂實現(xiàn)模式蛋白的釋放從而達到純化的目的。這個例子其實就能夠很好的體現(xiàn)固定吸附和基于固定吸附的蛋白質(zhì)純化之間的關(guān)系。 |
2樓2011-08-01 14:30:45
imfly77
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附上兩篇文獻 http://u.115.com/file/clv34amb# 2004-AEM-In_vivo_immobilization_of_fusion_proteins_on_bioplastics_by_the_novel_tag_BioF.pdf http://u.115.com/file/dnsmlbzd# 2005-Protein_Sci-Novel_and_economical_purification_of_recombinant_proteins_Intein-mediated_protein_purification_using_in_vivo_polyhydroxybutyrate_(PHB)_matrix_association.pdf |
3樓2011-08-01 14:39:42
zouxy
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4樓2011-08-03 10:35:41
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