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空谷幽風(fēng)

金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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10樓: Originally posted by vickie20 at 2011-08-04 19:34:45:
但是超螺旋啊開(kāi)環(huán)啊的位置都應(yīng)該在線性的下面吧？也就是說(shuō)應(yīng)該是在目的位置的下面吧？

質(zhì)粒理論上是可以三種形式存在著，但實(shí)際跑膠時(shí)能看到一到三條帶都是正常的，并且如果質(zhì)粒提的質(zhì)量很好，基本上都是超螺旋的，所以要確定質(zhì)粒的大小，只有酶切后才能知道

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

11樓2011-08-04 23:07:13

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天使托

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T.Shen

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 辛苦 2011-08-05 10:45:04

看電泳圖，這應(yīng)該是載體，樓主是想提取重組載體進(jìn)行驗(yàn)證吧，重新進(jìn)行提取吧，如果按照你的信息，提取出來(lái)的載體應(yīng)該比線性化的小很多，可是出來(lái)居然在5000bp以上，最好做一個(gè)雙酶切，畢竟marker只是表征線性載體的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，只有將載體線性化才具有說(shuō)服性；
個(gè)人建議：重新提取質(zhì)粒，把膠配的好一些，你上面那張圖marker都跑成那樣子了，所以膠有點(diǎn)問(wèn)題；
提取出來(lái)的載體點(diǎn)樣的時(shí)候可以加一個(gè)空載體進(jìn)行對(duì)照，因?yàn)槟阒亟M載體連接了一個(gè)基因片段，按照樓主所說(shuō)的長(zhǎng)度，那么重組載體應(yīng)該比空載體大一些；
進(jìn)行一個(gè)雙酶切，然后點(diǎn)樣看看，點(diǎn)樣的時(shí)候帶上你當(dāng)時(shí)進(jìn)行酶切的空載體和酶切的基因作為對(duì)照，如果大小一致，那么恭喜你，對(duì)了；

加油！祝實(shí)驗(yàn)順利！

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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!

12樓2011-08-05 10:21:41

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longage.gene

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酶切結(jié)果如何？雙酶切？單酶切？切記，這種情況下，單雙都切最好。

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13樓2011-08-05 10:43:19

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vickie20

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引用回帖:

12樓: Originally posted by 天使托 at 2011-08-05 10:21:41:
看電泳圖，這應(yīng)該是載體，樓主是想提取重組載體進(jìn)行驗(yàn)證吧，重新進(jìn)行提取吧，如果按照你的信息，提取出來(lái)的載體應(yīng)該比線性化的小很多，可是出來(lái)居然在5000bp以上，最好做一個(gè)雙酶切，畢竟marker只是表征線性載體的 ...

謝謝~~~

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14樓2011-08-05 13:33:41

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vickie20

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13樓: Originally posted by longage.gene at 2011-08-05 10:43:19:
酶切結(jié)果如何？雙酶切？單酶切？切記，這種情況下，單雙都切最好。

不好意思，目前還沒(méi)做酶切

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15樓2011-08-05 13:34:14

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quiller2000

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切一下定吧，坦率的說(shuō)，用marker來(lái)確定質(zhì)粒的大小是不合適的，何況質(zhì)粒根本就不是我們想象的那么乖！

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致良知

16樓2011-08-05 15:21:54

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vickie20

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16樓: Originally posted by quiller2000 at 2011-08-05 15:21:54:
切一下定吧，坦率的說(shuō)，用marker來(lái)確定質(zhì)粒的大小是不合適的，何況質(zhì)粒根本就不是我們想象的那么乖！

嗯，用marker判斷大小是不合適，但是超螺旋和開(kāi)環(huán)的位置應(yīng)該是在線性的下面吧，那就是說(shuō)超螺旋和開(kāi)環(huán)的帶的位置是低于約4500的吧？

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17樓2011-08-05 15:37:54

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kenan8848

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這個(gè)應(yīng)該是提出來(lái)了，我也遇到類(lèi)似情況，用MARKER對(duì)照質(zhì)粒確實(shí)不靠譜。拿個(gè)別人提出的質(zhì)粒對(duì)照看看。

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真相只有一個(gè)

18樓2012-02-09 23:13:40

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