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vickie20銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
提不出質(zhì)粒，不知道出了什么問題，求助……
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我用的大腸桿菌BM25.8提質(zhì)粒，菌已經(jīng)保存一年多了，我用保存的菌液劃板，然后挑取單菌落接種到液體LB里搖過夜，再用這些長好的菌液提，用的是biomiga的試劑盒，按照說明書的步驟來的，操作是沒什么問題，這些質(zhì)�？蛰d體大小有3589bp，目的基因已經(jīng)測序，800-1000bp，提好后跑膠，用的5000bp的Marker，提出來的東西都比5000大，這些都不是質(zhì)粒吧？做了十來天了都一直都沒提好，不知道出了什么問題，原來看了好多帖子，變性時間啊，溫和混勻啊，這些我都小心操作了，但是都提不出來，不知道哪里出問題了，求各位幫我分析下，哪里出差錯了。 附上其中一張電泳圖。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 辛苦 2011-08-05 10:45:04
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): 辛苦 2011-08-05 10:45:04
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看電泳圖，這應(yīng)該是載體，樓主是想提取重組載體進行驗證吧，重新進行提取吧，如果按照你的信息，提取出來的載體應(yīng)該比線性化的小很多，可是出來居然在5000bp以上，最好做一個雙酶切，畢竟marker只是表征線性載體的一個標準，只有將載體線性化才具有說服性； 個人建議：重新提取質(zhì)粒，把膠配的好一些，你上面那張圖marker都跑成那樣子了，所以膠有點問題； 提取出來的載體點樣的時候可以加一個空載體進行對照，因為你重組載體連接了一個基因片段，按照樓主所說的長度，那么重組載體應(yīng)該比空載體大一些； 進行一個雙酶切，然后點樣看看，點樣的時候帶上你當時進行酶切的空載體和酶切的基因作為對照，如果大小一致，那么恭喜你，對了； 加油！祝實驗順利！ |
12樓2011-08-05 10:21:41
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