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wangdandelia木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒片段丟失問(wèn)題 已有6人參與
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各位蟲(chóng)友，我想請(qǐng)教一下，你們有沒(méi)有遇到質(zhì)粒轉(zhuǎn)到感受態(tài)細(xì)胞后，會(huì)丟失片段的問(wèn)題？ 我最近遇到了一個(gè)問(wèn)題，就是將質(zhì)粒切開(kāi)，人工插入一個(gè)片段，再連接后，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，結(jié)果得到的新的質(zhì)粒丟失了一個(gè)很大的片段，不知道這是什么原因，歡迎各位蟲(chóng)友來(lái)討論一下！我用的是一個(gè)含有轉(zhuǎn)座子的自殺質(zhì)粒，pRL27。但是在受體菌中是可以穩(wěn)定存在的。 我查找資料，至今還沒(méi)有找到相關(guān)的原因�？赡苁歉惺軕B(tài)細(xì)胞出了問(wèn)題，現(xiàn)在正準(zhǔn)備把原質(zhì)粒的菌體通過(guò)沒(méi)有抗性的LB培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，從而篩選一個(gè)完全丟失質(zhì)粒的受體菌，不知道這個(gè)方法可行不可行，需要注意什么問(wèn)題。 我做個(gè)對(duì)照試驗(yàn)，就是把提好的質(zhì)粒不任何處理，再次轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞中，然后從轉(zhuǎn)化子中提取質(zhì)粒，突然發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒條帶還有，但是質(zhì)粒條帶下方莫名其妙地多了一個(gè)條帶，請(qǐng)問(wèn)這怎么解釋呢？是不是感受態(tài)細(xì)胞污染了呢？ [ Last edited by wangdandelia on 2010-12-19 at 11:10 ] |
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