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wangdandelia木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】質粒片段丟失問題 已有6人參與
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各位蟲友，我想請教一下，你們有沒有遇到質粒轉到感受態(tài)細胞后，會丟失片段的問題？ 我最近遇到了一個問題，就是將質粒切開，人工插入一個片段，再連接后，轉化到感受態(tài)細胞中，結果得到的新的質粒丟失了一個很大的片段，不知道這是什么原因，歡迎各位蟲友來討論一下！我用的是一個含有轉座子的自殺質粒，pRL27。但是在受體菌中是可以穩(wěn)定存在的。 我查找資料，至今還沒有找到相關的原因�？赡苁歉惺軕B(tài)細胞出了問題，現在正準備把原質粒的菌體通過沒有抗性的LB培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，從而篩選一個完全丟失質粒的受體菌，不知道這個方法可行不可行，需要注意什么問題。 我做個對照試驗，就是把提好的質粒不任何處理，再次轉入感受態(tài)細胞中，然后從轉化子中提取質粒，突然發(fā)現質粒條帶還有，但是質粒條帶下方莫名其妙地多了一個條帶，請問這怎么解釋呢？是不是感受態(tài)細胞污染了呢？ [ Last edited by wangdandelia on 2010-12-19 at 11:10 ] |
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4樓2010-12-15 09:07:37
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