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wangdandelia木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】質(zhì)粒片段丟失問題 已有6人參與
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各位蟲友，我想請教一下，你們有沒有遇到質(zhì)粒轉(zhuǎn)到感受態(tài)細(xì)胞后，會丟失片段的問題？ 我最近遇到了一個問題，就是將質(zhì)粒切開，人工插入一個片段，再連接后，轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞中，結(jié)果得到的新的質(zhì)粒丟失了一個很大的片段，不知道這是什么原因，歡迎各位蟲友來討論一下！我用的是一個含有轉(zhuǎn)座子的自殺質(zhì)粒，pRL27。但是在受體菌中是可以穩(wěn)定存在的。 我查找資料，至今還沒有找到相關(guān)的原因�？赡苁歉惺軕B(tài)細(xì)胞出了問題，現(xiàn)在正準(zhǔn)備把原質(zhì)粒的菌體通過沒有抗性的LB培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，從而篩選一個完全丟失質(zhì)粒的受體菌，不知道這個方法可行不可行，需要注意什么問題。 我做個對照試驗，就是把提好的質(zhì)粒不任何處理，再次轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞中，然后從轉(zhuǎn)化子中提取質(zhì)粒，突然發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒條帶還有，但是質(zhì)粒條帶下方莫名其妙地多了一個條帶，請問這怎么解釋呢？是不是感受態(tài)細(xì)胞污染了呢？ [ Last edited by wangdandelia on 2010-12-19 at 11:10 ] |
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