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380218013金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】構(gòu)建質(zhì)粒問題 已有8人參與
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| 小弟構(gòu)質(zhì)粒時(shí)，涂布AMP平板有菌落，搖菌10H后菌液PCR有目的，但是小抽的時(shí)候發(fā)現(xiàn)沉淀的菌很少，所以小抽的濃度很低。 很困惑 不知道原因。請大蝦指教。 |
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖
dhd997(金幣+6, EPI+1): good 2011-04-19 19:01:38
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怎么很多同學(xué)有這個(gè)問題呢。 在構(gòu)建質(zhì)粒的時(shí)候，一定要選擇好質(zhì)粒和宿主的關(guān)系。 知道為什么pet32a最好選用的是BL21，為什么不是TOP10，不是DH5a 為什么與表達(dá)有關(guān)的修飾氨基酸的質(zhì)粒反而用Rosseta做宿主最好？ 明白配套的商業(yè)化的這些知識后，就知道怎么考慮問題了。 第一，你這個(gè)求助，沒有說明使用的什么質(zhì)粒？是商業(yè)化的質(zhì)粒，還是自己實(shí)驗(yàn)室自己夠造的質(zhì)粒。 第二，一般重組質(zhì)粒都會遇見拷貝數(shù)問題。 所以會有人保守性的先用TOP10等擴(kuò)增質(zhì)粒。然后質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株中。 第三，含量很少，做PCR就夠了，因?yàn)槟阋嘈�，指�?shù)增長是很嚇人的，1ul的量就足以擴(kuò)增出很多。 第四，GT116宿主會長菌長得很慢，但是比較不會染雜菌。故可以考慮延長時(shí)間培養(yǎng)等。 希望能幫到你！ |
8樓2011-04-19 16:32:20
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9樓2011-04-19 18:23:35
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