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380218013金蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】構(gòu)建質(zhì)粒問(wèn)題 已有8人參與
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| 小弟構(gòu)質(zhì)粒時(shí),涂布AMP平板有菌落,搖菌10H后菌液PCR有目的,但是小抽的時(shí)候發(fā)現(xiàn)沉淀的菌很少,所以小抽的濃度很低。 很困惑 不知道原因。請(qǐng)大蝦指教。 |

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
榮譽(yù)版主 (文壇精英)
這潭水藍(lán)的深邃
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

新蟲(chóng) (小有名氣)
榮譽(yù)版主 (職業(yè)作家)
暈暈小版主~ 姑娘你好!
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怎么很多同學(xué)有這個(gè)問(wèn)題呢。 在構(gòu)建質(zhì)粒的時(shí)候,一定要選擇好質(zhì)粒和宿主的關(guān)系。 知道為什么pet32a最好選用的是BL21,為什么不是TOP10,不是DH5a 為什么與表達(dá)有關(guān)的修飾氨基酸的質(zhì)粒反而用Rosseta做宿主最好? 明白配套的商業(yè)化的這些知識(shí)后,就知道怎么考慮問(wèn)題了。 第一,你這個(gè)求助,沒(méi)有說(shuō)明使用的什么質(zhì)粒?是商業(yè)化的質(zhì)粒,還是自己實(shí)驗(yàn)室自己夠造的質(zhì)粒。 第二,一般重組質(zhì)粒都會(huì)遇見(jiàn)拷貝數(shù)問(wèn)題。 所以會(huì)有人保守性的先用TOP10等擴(kuò)增質(zhì)粒。然后質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌株中。 第三,含量很少,做PCR就夠了,因?yàn)槟阋嘈,指?shù)增長(zhǎng)是很?chē)樔说模?ul的量就足以擴(kuò)增出很多。 第四,GT116宿主會(huì)長(zhǎng)菌長(zhǎng)得很慢,但是比較不會(huì)染雜菌。故可以考慮延長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)等。 希望能幫到你! |

銀蟲(chóng) (小有名氣)
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