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jian520yi木蟲 (正式寫手)
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[求助]
一個(gè)合成的約40bp的片段怎么引入載體？
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| 如題，我需要在載體中加入一個(gè)純化標(biāo)簽，標(biāo)簽兩邊酶切位點(diǎn)和載體一樣，但標(biāo)簽是合成的小片段，40bp，怎么做？就用合成片段來擴(kuò)增嗎？ 麻煩高手指點(diǎn)！ |
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shaquila
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adslye(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~祝順利！ 2011-08-05 19:25:26
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你合成的是雙鏈，還是用兩條引物退火而成 http://edu.www.gaoyang168.com/attachment/9c/48/654839_1299721150_644.jpg 可以利用兩個(gè)引物退火形成帶粘端小片段，然后和載體連接 |
2樓2011-08-04 19:08:59
jian520yi
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3樓2011-08-05 09:39:26
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4樓2011-08-05 10:26:17
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6樓2011-08-05 14:04:38
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7樓2011-08-05 14:39:18
shaquila
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adslye(金幣+2, BioEPI+1): 首次說明小片段鏈接，對(duì)新手很有參考意義！感謝您的分享，祝順利！ 2011-08-05 19:27:49
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技術(shù)路線很簡(jiǎn)單，引物回來稀釋成100pmol/ul 兩條各取2ul混勻成4ul，95度變性5min，慢退火（PCR 95度反應(yīng)后直接停止關(guān)機(jī)，30分鐘后拿出來放在室溫） 連接體系就是4ul小片段＋載體（能達(dá)到300ng最好）＋T4bufffer&ligase 連接反應(yīng)過夜～～ 做了兩次，一次是平端補(bǔ)平加酶切位點(diǎn)，一次是加his-tag，都成功了，只要小片段的酶切位點(diǎn)別設(shè)計(jì)錯(cuò)了就ok～ |
8樓2011-08-05 16:28:23
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9樓2011-08-05 16:41:03
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10樓2011-08-05 16:41:50
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