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zb0806030銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
合成的引物直接退火形成粘性末端后連入載體 已有5人參與
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求助：有沒有蟲友做過合成兩段互補(bǔ)的引物直接退火形成粘性末端以后再連入載體的？ 請問具體的方法是怎樣的呢？都需要加什么東西退火，反應(yīng)應(yīng)該怎么設(shè)置條件？ 謝謝啦！ |
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overhalfmoon
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8樓2013-12-21 23:25:01
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a. 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的去離子水配制成100μM。 b. 如下設(shè)置退火反應(yīng)體系： Nuclease-Free Water 70μl Oligo DNA annealing buffer（10×） 10μl DNA oligo A (100μM) 10μl DNA oligo B (100μM) 10μl Total 100μl 按照上述順序依次加入各種試劑，混勻。 Oligo DNA annealing buffer (10×)：100mM Tris pH8.0, 500mM NaCl, 10mM EDTA Place tube in a standard heatblock at 90–95 °C for 3–5 minutes. Remove the heat block from the apparatus and allow to cool to room temperature (or at least below 30 °C) on the workbench. Slow cooling to room temperature should take 45–60 minute |
11樓2013-12-22 13:01:24
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