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[求助]
合成的引物直接退火形成粘性末端后連入載體 已有5人參與
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求助：有沒有蟲友做過合成兩段互補的引物直接退火形成粘性末端以后再連入載體的？ 請問具體的方法是怎樣的呢？都需要加什么東西退火，反應應該怎么設(shè)置條件？ 謝謝啦！ |
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a. 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌的去離子水配制成100μM。 b. 如下設(shè)置退火反應體系： Nuclease-Free Water 70μl Oligo DNA annealing buffer（10×） 10μl DNA oligo A (100μM) 10μl DNA oligo B (100μM) 10μl Total 100μl 按照上述順序依次加入各種試劑，混勻。 Oligo DNA annealing buffer (10×)：100mM Tris pH8.0, 500mM NaCl, 10mM EDTA Place tube in a standard heatblock at 90–95 °C for 3–5 minutes. Remove the heat block from the apparatus and allow to cool to room temperature (or at least below 30 °C) on the workbench. Slow cooling to room temperature should take 45–60 minute |
11樓2013-12-22 13:01:24
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