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zgb1982木蟲 (正式寫手)
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[求助]
計算引物退火溫度時末端加的酶切位點計算在內嗎？
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| 求助，RT！加的酶切位點要不要算在內。 |
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2樓2011-08-04 21:02:38
3樓2011-08-04 21:55:58
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4樓2011-08-04 22:14:51
gwbk
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【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:09:54
zgb1982(金幣+1): 2011-08-05 14:46:41
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都需要計算在內的 1，第一、二次擴增（循環(huán)），退火溫度按互補堿基數(shù)計算（一般不包括酶切位點和保護堿基序列）。 2，第三次擴增分兩種情況，以原始模板、第一次擴增的序列、第二次以原始模板擴增的序列，與第一步退火溫度計算相同；以第二次擴增出來的序列（帶有兩端引物和保護堿基的全基因序列）為模板，此時引物與模板完全互補，退火溫度按引物全部序列計算。 3，合成中后期，兩端全部與引物互補的DNA片段占有絕對優(yōu)勢。 應該按照全部序列計算退火溫度。 |
5樓2011-08-05 00:11:18
gwbk
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6樓2011-08-05 00:21:14
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