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zgb1982木蟲 (正式寫手)
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[求助]
計(jì)算引物退火溫度時(shí)末端加的酶切位點(diǎn)計(jì)算在內(nèi)嗎？
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| 求助，RT！加的酶切位點(diǎn)要不要算在內(nèi)。 |
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3樓2011-08-04 21:55:58
天使托
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T.Shen
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2樓2011-08-04 21:02:38
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4樓2011-08-04 22:14:51
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【答案】應(yīng)助回帖
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dhd997(金幣+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:09:54
zgb1982(金幣+1): 2011-08-05 14:46:41
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:09:54
zgb1982(金幣+1): 2011-08-05 14:46:41
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都需要計(jì)算在內(nèi)的 1，第一、二次擴(kuò)增（循環(huán)），退火溫度按互補(bǔ)堿基數(shù)計(jì)算（一般不包括酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基序列）。 2，第三次擴(kuò)增分兩種情況，以原始模板、第一次擴(kuò)增的序列、第二次以原始模板擴(kuò)增的序列，與第一步退火溫度計(jì)算相同；以第二次擴(kuò)增出來的序列（帶有兩端引物和保護(hù)堿基的全基因序列）為模板，此時(shí)引物與模板完全互補(bǔ)，退火溫度按引物全部序列計(jì)算。 3，合成中后期，兩端全部與引物互補(bǔ)的DNA片段占有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。 應(yīng)該按照全部序列計(jì)算退火溫度。 |
5樓2011-08-05 00:11:18
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