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藍(lán)慧木蟲 (正式寫手)
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[求助]
平末端連接不上，求助
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| 大家好，本人最近在做平末端連接，我的PCR產(chǎn)物是混合引物PCR結(jié)果，用的是東洋紡的KOD-PLUS-NEO酶，PCR產(chǎn)物用OMEGA膠回收試劑盒進(jìn)行回收，30微升體積稀釋，回收后電泳檢測(cè)有特異單一條帶，濃度大約為150ng/ul，目的片段大小約為1500bp。接著進(jìn)行連接，用的載體是全式金pEASY-blunt zero clonig KIT,連接體系5微升，包括2微升PCR產(chǎn)物，1微升載體，25度15min,之后50微升感受態(tài)轉(zhuǎn)化，涂板，過夜培養(yǎng)，其中培養(yǎng)基為L(zhǎng)B。培養(yǎng)后挑選白色菌落搖菌4小時(shí)M13引物菌液檢測(cè)，可是PCR檢測(cè)只有在100以下有個(gè)帶，完全沒有目的帶，已經(jīng)做了3次都是如此�，F(xiàn)在都不知道是什么問題，請(qǐng)求各位蟲子指點(diǎn)迷津，不勝感激！ |
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cicelyzh
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