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feiye2214木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助/交流】粘性末端連接問(wèn)題 已有4人參與
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小弟在做一個(gè)連接，質(zhì)粒大小4.2kb，目的片段1.6kb 質(zhì)粒中有EcoR I和BamH I酶切位點(diǎn)，1.6kb的PCR片段兩端也被設(shè)計(jì)了這兩個(gè)酶切位點(diǎn) 我的流程是：把質(zhì)粒從菌中提出來(lái)，PCR片段是擴(kuò)增得到；然后用兩種限制性酶酶切這兩個(gè)片段，得到具有粘性末端的4.2kb和1.6kb的片段；一定量跑膠之后，割膠提純目的片段；提純液用于連接反應(yīng) 全程都是采用試劑盒 我想問(wèn)的是：跑膠之后提純，是不是會(huì)損傷DNA��？尤其是粘性末端！ 能不能在酶切之后就連接反應(yīng)，不要經(jīng)過(guò)提純這一步（跑膠顯示條帶單一，沒(méi)有雜帶），那里面的限制性酶會(huì)不會(huì)影響連接��？ 求高手指點(diǎn) |
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