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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 請教一下連接與轉化問題！
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XUMIN6891金蟲 (初入文壇)
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請教一下連接與轉化問題！
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| 各位大俠你們好！我想請教一下一個問題，我現在做的是串聯表達，我是先分別擴增兩段長度一樣的串聯片段，并且串聯片段的序列都是重復的，然后我在這兩段串聯片段設計一個相同的限制性內切酶，目的是通過這個酶把這兩段串聯的片段連接起來，這樣的話，我串聯的長度就延長了，我現在時擴增的兩段片段也都擴出來了，兩段片段的大小都是350bp左右，然后雙酶切，第一段片段我用ECORI和Sal I雙酶切，第二段我用Sal I和Xhol I雙酶切，條帶也都有，然后我把這兩段雙酶切回收的產物和PET-30a（+）載體雙酶切【載體用ECORI，Xhol I雙酶切回收】這三段我在一個體系里面連接，然后轉化，但是最后我挑菌進行pcr鑒定擴出來的條帶大小只有350bp多，按說連上應該是680bp多，雙酶切鑒定也沒有那條目的條帶的條帶，這樣不是說我沒連上嗎，這樣的話我應該怎樣改進啊？請各位指導一下！謝謝！我以前做出來的一段串聯片段也是按這種方法做的，測序也都正確！ |
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