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XUMIN6891金蟲 (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)教一下連接與轉(zhuǎn)化問題！
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| 各位大俠你們好！我想請(qǐng)教一下一個(gè)問題，我現(xiàn)在做的是串聯(lián)表達(dá)，我是先分別擴(kuò)增兩段長(zhǎng)度一樣的串聯(lián)片段，并且串聯(lián)片段的序列都是重復(fù)的，然后我在這兩段串聯(lián)片段設(shè)計(jì)一個(gè)相同的限制性內(nèi)切酶，目的是通過這個(gè)酶把這兩段串聯(lián)的片段連接起來，這樣的話，我串聯(lián)的長(zhǎng)度就延長(zhǎng)了，我現(xiàn)在時(shí)擴(kuò)增的兩段片段也都擴(kuò)出來了，兩段片段的大小都是350bp左右，然后雙酶切，第一段片段我用ECORI和Sal I雙酶切，第二段我用Sal I和Xhol I雙酶切，條帶也都有，然后我把這兩段雙酶切回收的產(chǎn)物和PET-30a（+）載體雙酶切【載體用ECORI，Xhol I雙酶切回收】這三段我在一個(gè)體系里面連接，然后轉(zhuǎn)化，但是最后我挑菌進(jìn)行pcr鑒定擴(kuò)出來的條帶大小只有350bp多，按說連上應(yīng)該是680bp多，雙酶切鑒定也沒有那條目的條帶的條帶，這樣不是說我沒連上嗎，這樣的話我應(yīng)該怎樣改進(jìn)�。空�(qǐng)各位指導(dǎo)一下！謝謝！我以前做出來的一段串聯(lián)片段也是按這種方法做的，測(cè)序也都正確！ |
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panda73
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