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wjger新蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】PEGFP-N1與目的條帶連不上 已有5人參與
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載體：PEGFP-N1 目的基因大�。�1500bp左右 酶切位點(diǎn)：Hind3、BamH1 連接酶：TAKARA T4連接酶 實(shí)驗(yàn)過(guò)程：PCR產(chǎn)物與19T-simple載體連接，雙酶切后，載體帶與目的帶很好，回收目的帶與PEGFP雙酶切回收結(jié)果連接，一直連不上。  |
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snowice
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2樓2010-08-25 16:57:43
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3樓2010-08-27 11:00:46
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我和你做的非常接近
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看天(金幣+2):謝謝交流 2010-08-27 14:50:12
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看天(金幣+2):謝謝交流 2010-08-27 14:50:12
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我做的是pEGFP-1連接一個(gè)1.6kb的片段，雙酶切EcoR I/BamH I，1.6kb的片段是PCR出來(lái)的，兩端已經(jīng)將酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)進(jìn)引物序列了，我酶切后也跑過(guò)電泳再回收膠中DNA（具備粘性末端）的，但是效果也不好 后來(lái)，直接不跑膠回收了，用清潔試劑盒來(lái)清潔PCR產(chǎn)物的酶切溶液和質(zhì)粒的酶切溶液后，然后直接連接，轉(zhuǎn)化，一次成功  |
5樓2010-08-27 13:09:59
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6樓2010-08-28 16:58:54
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7樓2015-03-23 21:51:42
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