 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 5339 | 回復(fù): 7 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 MolEPI ，點擊這里進行查看 | ||||
h411470316鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
瓊脂糖電泳沒有條帶，但是DNA濃度很高，1000+ng/ul maker有條帶
|
|||
| Sample Text本人最近幾次PCR產(chǎn)物跑膠總是沒條帶，操作和以往經(jīng)驗一樣，用1%的TBE瓊脂糖凝膠電泳，跑25分鐘左右，但是一直都沒有條帶，maker可以正常跑出，目的片段是750bp左右的片段，換了人操作，結(jié)果也是一樣，但是測PCR產(chǎn)物DNA濃度的時候又有約1000+ng/ul，這是什么情況啊，求各位高人分析指點，小弟不甚感激�。�！ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生物 | 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有196人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 有關(guān)電泳實驗的問題
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 急求RT-PCR電泳圖分析
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 求助，為什么SSR擴增產(chǎn)物瓊脂糖跑出的條帶會比maker最大分子量還要大呢？？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 蛋白電泳，第二向，溴酚藍不是一條線，有兩個向上的凸起，是什么原因造成的啊
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 環(huán)境樣品地下水中細菌總DNA的提取方法
已經(jīng)有23人回復(fù)
- 小片段DNA電泳看不見條帶
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 瓊脂糖凝膠電泳，跑的條帶有點難看
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 質(zhì)粒提取瓊脂糖電泳的3個條帶，到底每條是什么？
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 提取RNA時，為何會有DNA條帶，并且有且只有一條帶？
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 提基因組DNA電泳有三條帶是怎么回事啊?
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】急！��！瓊脂糖凝膠電泳的問題，跑不出條帶了��！
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【求助/交流】蛋白Maker的條帶問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, Good！有理有據(jù)！ 2012-04-08 16:45:00
h411470316: 金幣+9, ★★★★★最佳答案 2012-04-10 19:54:23
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西瓜: 金幣+5, MolEPI+1, Good！有理有據(jù)！ 2012-04-08 16:45:00
h411470316: 金幣+9, ★★★★★最佳答案 2012-04-10 19:54:23
|
嗯..................... 說實話，你這個操作是個失誤哦，你測PCR產(chǎn)物是通過分光光度法測定的嗎？如果是，絕對不能這么操作的啊，原因有以下： 1. 你如何調(diào)Blank，PCR體系混雜，難道你要再配一管沒模板的PCR混合液去調(diào)Blank的嗎？ 2. PCR都是成指數(shù)（理想狀態(tài)）擴增，數(shù)十個循環(huán)的正常PCR產(chǎn)物去測光密度，可能都會暴表了。 3. 分光光度法又沒法分辨你的產(chǎn)物和其他類型核酸的，所以你的引物在里邊也會正常讀出來的 所以確定有沒有PCR產(chǎn)物只能是電泳或熒光定量的方法來檢驗 祝實驗順利，若有說錯請高手指正哦  |
2樓2012-04-07 23:36:00
wtyyyyy1988
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 49 (小學(xué)生)
- 金幣: 6399
- 散金: 490
- 紅花: 2
- 帖子: 697
- 在線: 153.6小時
- 蟲號: 1196990
- 注冊: 2011-01-27
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
3樓2012-04-08 00:08:57
h411470316
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 9
- 帖子: 6
- 在線: 54分鐘
- 蟲號: 1742497
- 注冊: 2012-04-07
- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
4樓2012-04-10 19:57:12
h411470316
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 9
- 帖子: 6
- 在線: 54分鐘
- 蟲號: 1742497
- 注冊: 2012-04-07
- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
5樓2012-04-10 19:57:58
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
|
針對你這種情況，我也明白你為什么擴不出來了，PCR是有模板量限制的，這很多人知道但不明白為什么。 舉個例子來說，為什么PCR到40多循環(huán)進入平臺期后就不再有高擴增效率，這并非是酶不強勁，現(xiàn)代重組工業(yè)生產(chǎn)的酶即使是在PCR循環(huán)后期仍舊活力很高。 同樣這也不是組份消耗過多的問題，如果你加入兩倍量dNTP、引物，到40循環(huán)左右仍舊會進入平臺期，擴增效率下降。 問題在哪里，是聚合酶有傾向于結(jié)合完整雙鏈的特點，如果退火條件稍差，模板-引物結(jié)合的趨勢仍會遜于模板模板相結(jié)合，造成其對聚合酶的競爭效應(yīng)，所以初始模板過多和循環(huán)一定程度這兩種情況可以說是等同的。 所以，若你擴不出來東西，首先嘗試調(diào)整條件，引物一般只要不是很夸張，一般PCR的應(yīng)用是沒有什么特異特異性的可言的 |
6樓2012-04-10 21:02:58
萌主李萌萌
銅蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 384.5
- 帖子: 43
- 在線: 11.3小時
- 蟲號: 1947816
- 注冊: 2012-08-20
- 性別: MM
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
7樓2012-08-22 18:21:39
guanjinyan87
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 159.8
- 帖子: 117
- 在線: 33.3小時
- 蟲號: 1403116
- 注冊: 2011-09-15
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物化學(xué)
學(xué)習(xí)了 8樓2012-11-27 21:42:14
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 h411470316 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑 +5 | 為學(xué)666 2026-03-16 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +3 | 困于星晨 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動化所實習(xí) +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +10 | 大米飯！ 2026-03-15 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +3 | 張vvvv 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿985，本科211，0817化學(xué)工程與技術(shù)319求調(diào)劑 +5 | Liwangman 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 求調(diào)劑 +13 | enenenhui 2026-03-13 | 14/700 |
|
|
|
[考研]
 機械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑 +4 | 奇點0314 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 336求調(diào)劑 +6 | Iuruoh 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調(diào)劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +6 | Liyouyumairs 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | 芬達46 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 309分請求調(diào)劑 +7 | dtdxzxx 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 化工學(xué)碩306求調(diào)劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|