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木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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[求助] 瓊脂糖凝膠電泳，跑的條帶有點(diǎn)難看

這個(gè)是我酶切之后跑的電泳圖，除了Marker和一個(gè)PCR的產(chǎn)物跑的條帶是直線型的，怎么其他酶切的都好像跑的稍微有點(diǎn)快了？？呈現(xiàn)那種所謂的微笑狀，請(qǐng)各位蟲(chóng)蟲(chóng)幫忙分析一下原因。緩沖液？膠？還是本身質(zhì)粒沒(méi)有提好？？？
底下的小片段是目的條帶，大小應(yīng)該和PCR的產(chǎn)物是一樣的大小，但是從圖片上看的話就是要小一些。
之前因?yàn)镽NA酶的問(wèn)題，所以最近的幾次提質(zhì)粒都沒(méi)有進(jìn)行消化，圖片有點(diǎn)難看，望各位見(jiàn)諒��！

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1樓 2011-08-13 19:09:50

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【答案】應(yīng)助回帖

1949stone: 恐怕不是 2011-08-13 20:14:17
yesucao(金幣+1): 2011-08-13 22:47:10

微笑型條帶是因?yàn)槟z不均勻?qū)е碌呐�，你看看是否藥品失效，如凝膠催化劑，或者是你實(shí)驗(yàn)室溫度太低了

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2樓2011-08-13 19:33:00

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5): Good 2011-08-14 09:06:46
西瓜(MolEPI+1): 補(bǔ)上 2011-08-14 09:07:12
yesucao(金幣+5): 恩，你的建議我會(huì)認(rèn)真采納的 2011-08-14 09:43:43

原因分析：
1、膠不勻稱(chēng)。膠不勻稱(chēng)自然就要出現(xiàn)不規(guī)則圖形。但從上圖看N多都是月牙形，所以我感覺(jué)不大可能是膠不勻稱(chēng)。
2、電壓不穩(wěn)。電壓不穩(wěn)，會(huì)對(duì)質(zhì)粒的牽引力發(fā)生扭曲。自然也要不規(guī)則�？梢约哟箅妷航鉀Q問(wèn)題�；蛘邠Q新緩沖液。一般是以正負(fù)極距離為準(zhǔn)。1cm為5個(gè)電壓。跑膠不超過(guò)1h。
建議，把跑膠的槽子等，全部清洗干凈，烘干。換新的緩沖液，加電壓120V以上，50min。

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9樓2011-08-13 22:57:44

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 19:33:00:
微笑型條帶是因?yàn)槟z不均勻?qū)е碌呐叮憧纯词欠袼幤肥�，如凝膠催化劑，或者是你實(shí)驗(yàn)室溫度太低了

如果按你所說(shuō)的話，那除了PCR的產(chǎn)物，Marker，還有一個(gè)酶切的也是挺好的，只有最上面的一條帶，也是直線型的，是否可以排除凝膠不均勻的情況？？？
凝膠的時(shí)間在30-40min。
實(shí)驗(yàn)室的小槽子壞了，我用的是28cm的大槽子，電壓只能在75左右，電流在100mA，跑了1.5h，這個(gè)是否會(huì)成為可能的潛在因素？？？

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3樓2011-08-13 20:25:20

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【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金幣+4, MolEPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-13 21:29:51
yesucao(金幣+4): 說(shuō)的有道理，今后我會(huì)注意的 2011-08-13 22:49:40

引用回帖:

3樓: Originally posted by yesucao at 2011-08-13 20:25:20:
如果按你所說(shuō)的話，那除了PCR的產(chǎn)物，Marker，還有一個(gè)酶切的也是挺好的，只有最上面的一條帶，也是直線型的，是否可以排除凝膠不均勻的情況？？？
凝膠的時(shí)間在30-40min。
實(shí)驗(yàn)室的小槽子壞了，我用的是28cm的 ...

按理你其他都不會(huì)，那與電壓也無(wú)關(guān)啊，要是電壓有關(guān)系，全都這樣了，這個(gè)更說(shuō)不過(guò)去，不過(guò)你的電壓也太小了，一般要在120以上，150以下會(huì)比較好。
我看你基本都是笑臉，這個(gè)與樣品基本上沒(méi)關(guān)系了，我還是認(rèn)為與配膠有關(guān)。
另外，你拔梳子時(shí)也要注意，如果加樣孔不規(guī)整，或梳子不干凈引入了臟東西也是有可能的，你可以把梳子洗干凈些，然后拔時(shí)快點(diǎn)，畢竟是DNA電泳，膠不平整我覺(jué)得很正常，如SDS電泳豎直的，有卡板，就比較少見(jiàn)。

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4樓2011-08-13 20:41:57

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yesucao(金幣+1): 2011-08-13 22:49:55

不然你可以試試，多讓它凝固一段時(shí)間試試，凝它一個(gè)小時(shí)，還可以看看是不是催化劑失效了，盡量要放在干燥器中，催化劑失效凝固時(shí)間就會(huì)延長(zhǎng)，就可能導(dǎo)致膠不均勻，因?yàn)閮蛇吺遣叟c槽的邊界，自然跑得慢，中間如果尚未完全凝固自然就快了。

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5樓2011-08-13 20:46:30

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yesucao(金幣+1): 2011-08-13 23:00:44

兩個(gè)Marker ? Marker 正常，換用75的電壓應(yīng)該影響不大，可能還是酶切的問(wèn)題，酶切不完全？

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6樓2011-08-13 20:52:48

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4樓: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 20:41:57:
按理你其他都不會(huì)，那與電壓也無(wú)關(guān)啊，要是電壓有關(guān)系，全都這樣了，這個(gè)更說(shuō)不過(guò)去，不過(guò)你的電壓也太小了，一般要在120以上，150以下會(huì)比較好。
我看你基本都是笑臉，這個(gè)與樣品基本上沒(méi)關(guān)系了，我還是認(rèn)為與 ...

實(shí)驗(yàn)室的小槽子都?jí)牧�，暫時(shí)是在大的電泳槽中跑的（寬28cm左右），只做了一個(gè)5cm左右的小膠，因?yàn)槭墙栌脛e人的槽子，與變壓器不是很配套，電壓最高也只能上升到75左右，之前一段時(shí)間用小槽子跑的時(shí)候也沒(méi)出現(xiàn)過(guò)這種問(wèn)題

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7樓2011-08-13 22:54:20

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5樓: Originally posted by 416114799 at 2011-08-13 20:46:30:
不然你可以試試，多讓它凝固一段時(shí)間試試，凝它一個(gè)小時(shí)，還可以看看是不是催化劑失效了，盡量要放在干燥器中，催化劑失效凝固時(shí)間就會(huì)延長(zhǎng)，就可能導(dǎo)致膠不均勻，因?yàn)閮蛇吺遣叟c槽的邊界，自然跑得慢，中間如果尚 ...

催化劑是什么東東？？

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8樓2011-08-13 22:55:59

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這段時(shí)間跑其他的時(shí)候也出現(xiàn)過(guò)，一塊小膠，中間的跑的還可以，拖尾的不厲害，兩頭的就拖得很長(zhǎng)，最近發(fā)現(xiàn)的這個(gè)問(wèn)題。
以后會(huì)注意的，盡量讓膠凝固的時(shí)間延長(zhǎng)

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10樓2011-08-13 23:00:21

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