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yesucao木蟲 (正式寫手)
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瓊脂糖凝膠電泳，跑的條帶有點(diǎn)難看
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這個(gè)是我酶切之后跑的電泳圖，除了Marker和一個(gè)PCR的產(chǎn)物跑的條帶是直線型的，怎么其他酶切的都好像跑的稍微有點(diǎn)快了？？呈現(xiàn)那種所謂的微笑狀，請(qǐng)各位蟲蟲幫忙分析一下原因。緩沖液？膠？還是本身質(zhì)粒沒有提好？？？ 底下的小片段是目的條帶，大小應(yīng)該和PCR的產(chǎn)物是一樣的大小，但是從圖片上看的話就是要小一些。 之前因?yàn)镽NA酶的問題，所以最近的幾次提質(zhì)粒都沒有進(jìn)行消化，圖片有點(diǎn)難看，望各位見諒��！ |
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2樓2011-08-13 19:33:00
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金幣+5): Good 2011-08-14 09:06:46
西瓜(MolEPI+1): 補(bǔ)上 2011-08-14 09:07:12
yesucao(金幣+5): 恩，你的建議我會(huì)認(rèn)真采納的 2011-08-14 09:43:43
西瓜(金幣+5): Good 2011-08-14 09:06:46
西瓜(MolEPI+1): 補(bǔ)上 2011-08-14 09:07:12
yesucao(金幣+5): 恩，你的建議我會(huì)認(rèn)真采納的 2011-08-14 09:43:43
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原因分析： 1、膠不勻稱。膠不勻稱自然就要出現(xiàn)不規(guī)則圖形。但從上圖看N多都是月牙形，所以我感覺不大可能是膠不勻稱。 2、電壓不穩(wěn)。電壓不穩(wěn)，會(huì)對(duì)質(zhì)粒的牽引力發(fā)生扭曲。自然也要不規(guī)則。可以加大電壓解決問題�；蛘邠Q新緩沖液。一般是以正負(fù)極距離為準(zhǔn)。1cm為5個(gè)電壓。跑膠不超過1h。 建議，把跑膠的槽子等，全部清洗干凈，烘干。換新的緩沖液，加電壓120V以上，50min。 |
9樓2011-08-13 22:57:44
yesucao
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3樓2011-08-13 20:25:20
【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+4, MolEPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-13 21:29:51
yesucao(金幣+4): 說的有道理，今后我會(huì)注意的 2011-08-13 22:49:40
amisking(金幣+4, MolEPI+1): 鼓勵(lì)應(yīng)助 2011-08-13 21:29:51
yesucao(金幣+4): 說的有道理，今后我會(huì)注意的 2011-08-13 22:49:40
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按理你其他都不會(huì)，那與電壓也無關(guān)啊，要是電壓有關(guān)系，全都這樣了，這個(gè)更說不過去，不過你的電壓也太小了，一般要在120以上，150以下會(huì)比較好。 我看你基本都是笑臉，這個(gè)與樣品基本上沒關(guān)系了，我還是認(rèn)為與配膠有關(guān)。 另外，你拔梳子時(shí)也要注意，如果加樣孔不規(guī)整，或梳子不干凈引入了臟東西也是有可能的，你可以把梳子洗干凈些，然后拔時(shí)快點(diǎn)，畢竟是DNA電泳，膠不平整我覺得很正常，如SDS電泳豎直的，有卡板，就比較少見。 |
4樓2011-08-13 20:41:57
5樓2011-08-13 20:46:30
xbl3688
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6樓2011-08-13 20:52:48
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7樓2011-08-13 22:54:20
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8樓2011-08-13 22:55:59
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10樓2011-08-13 23:00:21
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