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wzhgaochuan新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
玉米轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)中遇到的問(wèn)題
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最近一直在做玉米轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)，但是總也沒(méi)有目的帶。想知道是怎么做的，基因組有什么要求OD260: OD280為多少，多少納克。具體的體系等等，我的引物最適合退火為53度。目的基因1400bp. 麻煩大家?guī)鸵幌旅Π�，急著要畢業(yè)，要是出不來(lái)結(jié)果會(huì)被延期啊~~· |
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3樓2011-08-12 10:49:26
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【答案】應(yīng)助回帖
wzhgaochuan(金幣+2): 謝謝您的回答啦，受益匪淺，希望試驗(yàn)?zāi)艹鰜?lái)。 2011-08-12 15:49:36
| 寫(xiě)的太不詳細(xì)了。是自己做的轉(zhuǎn)基因植株的驗(yàn)證，還是市面上買(mǎi)來(lái)的玉米面的轉(zhuǎn)基因檢測(cè)？不管哪種，都不該用1.4k的檢測(cè)pcr，太長(zhǎng)了，300-500還差不多。直接從葉片提基因組比較簡(jiǎn)單，用于做pcr模板的話，質(zhì)量要求不是那么高。建議多了解一下轉(zhuǎn)基因的插入序列，只選目的基因的一段用來(lái)做pcr，只要這一段是野生型玉米里面沒(méi)有的就行。 |
2樓2011-08-12 09:31:02
w2boluo
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【答案】應(yīng)助回帖
| 選插入序列的一段用來(lái)作為靶片段，這個(gè)片段一般是玉米基因組中本身沒(méi)有的。例如如果使用玉米的ubi啟動(dòng)子，就不能針對(duì)ubi啟動(dòng)子設(shè)計(jì)引物，而要根據(jù)ubi啟動(dòng)的后半段序列加上插入編碼區(qū)（或RNAi莖環(huán)的莖區(qū)）前半段，約在400-600bp的靶片段設(shè)計(jì)引物。產(chǎn)物要避開(kāi)諸如RNAi的莖環(huán)結(jié)構(gòu)區(qū)。退火溫度可以通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定。 |
4樓2011-08-12 11:44:49
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5樓2011-08-12 15:05:47
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