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銀蟲(chóng) (小有名氣)

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專(zhuān)業(yè): 生物技術(shù)藥物

[求助] 引物及載體/宿主菌選擇（用于酶表達(dá)）

本人查到的Alcaligenes faecalis DA1 D-氨基�；感蛄兄挥蠧DS區(qū)，為了表達(dá)這種酶，設(shè)計(jì)引物是不是就沒(méi)得選擇，上游引物只能是從ATG開(kāi)始的一段序列，下游引物就是終止密碼前的一段序列了（用軟件看這兩段引物得分都很低，目的基因可能不好P）。相應(yīng)地載體該如何選擇，比如怎么判斷載體上有沒(méi)有合適的啟動(dòng)子，我打算就用實(shí)驗(yàn)室的PET 30a做表達(dá)，宿主菌就用BL21，這樣選擇有沒(méi)有什么問(wèn)題。下面附上了我查到的目的序列，
FEATURES          Location/Qualifiers
   source       1..1455
                  /organism="Alcaligenes faecalis"
                  /mol_type="genomic DNA"
                  /db_xref="taxon:511"
   CDS          1..1455
                  /EC_number="3.5.1.81"
                  /note="DaaAF"
                  /codon_start=1
                  /transl_table=11
                  /product="D-aminoacylase"
                  /protein_id="AAK15530.1"
                  /db_xref="GI:13194736"
                  /translation="MSQPDATPFDYILSGGTVIDGTNAPGRLADVGVRGDRIAAVGDLSASSARRRIDVAGKVVSPGFIDSHTHDDNYLLKHRDMTPKISQGVTTVVTGNCGISLAPLAHANPPAPLDLLDEGGSFRFARFSDYLEALRAAPPAVNAACMVGHSTLRAAVMPDLRREATADEIQAMQALADDALASGAIGISTGAFYPPAAHASTEEIIEVCRPLITHGGVYTHMRDEGEHIVQALEETFRIGRELDVPVVISHHKVMGKLNFGRSKETLALIEAAMASQDVSLDAYPYVAGSTMLKQDRVLLAGRTLITWCKPYPELSGRDLEEIAAERGKSKYDVVPELQPAGAIYFMMDEPDVQRILAFGPTMIGSDGLPHDERPHPRLWGTFPRVLGHYSRDLGLFPLETAVWKMTGLTAAKFGLAERGQVQPGYYADLVVFDPATVADSATFEHPTERAAGIHSVYVNGAAVWEDQSFTGQHAGRVLNRAGA"
ORIGIN
      1 atgtcccagc ccgacgccac cccgttcgac tacatacttt ccggcggcac cgtcatcgac
   61 ggcacgaacg cgccaggccg gctcgccgac gtgggcgtgc ggggcgatcg gattgccgcc
   121 gtcggcgacc tgagcgccag cagcgcccgc cggcgcatcg acgtggcggg aaaagtggtg
   181 tctccgggct tcatcgactc gcacacgcat gacgacaact acctgctgaa acaccgcgac
   241 atgacgccca agatctcgca gggcgtcacc accgtggtca cgggcaactg cggtatcagt
   301 ctcgccccgc tggcgcacgc caatccgccc gcgccgctgg atctgctgga cgaaggcggc
   361 tcgttccgct ttgcacgctt ctcggactac ctcgaagccc tgcgcgccgc gccgcctgcc
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   781 gggcgctcca aggaaacgct ggccttgatc gaggcggcca tggccagcca ggacgtatcg
   841 ctggacgcct atccctacgt ggcgggctcc accatgctca agcaggaccg cgtcctgctt
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   961 gaagaaatcg ccgccgagcg aggcaagtcc aagtacgacg tggtgcccga actgcagccc
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   1141 ggaacgtttc cccgggtgct gggccactac tcgcgcgacc tgggcctgtt cccattggag
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   1441 cgggccggag cctga

回復(fù)此樓

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1樓 2011-08-12 14:52:26

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blackrose8089

鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)

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專(zhuān)業(yè): 植物學(xué)研究的新技術(shù)、新方

★
西瓜(金幣+1): 有道理 2011-08-12 18:21:48

蛋白表達(dá)這個(gè)不太好說(shuō)，除了載體、菌株之外，還有誘導(dǎo)條件等因素限制，樓主不妨先用手上的條件試一下！

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回復(fù)此樓

jiayoubashaonian

2樓2011-08-12 16:28:24

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