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[求助]
禽流感的分離方法
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| 請(qǐng)各位指點(diǎn)一二： 我從鴨場(chǎng)采集的病料分離禽流感病毒（臨床疑似禽流感），第一次未分離到病毒，第二次我采集了 肝 脾 心臟 腦 還是未分離到病毒。請(qǐng)問(wèn)這是為什么呢？ 分離病毒的方法都有哪些呢？ |
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rainwander(金幣+4): 鼓勵(lì)交流 2011-08-17 07:12:50
04swlxy(金幣+10): 回帖很仔細(xì)，內(nèi)容很有用 2011-10-21 19:55:07
zhang8826857(MicEPI+1): lz反饋很有用，獎(jiǎng)勵(lì)EPI一個(gè)^_^繼續(xù)努力啊^_^ 2011-10-22 10:29:16
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| 采集氣管粘液或泄殖腔粘液，或病變組織（呼吸道、消化道），加純水制作勻漿（10％懸液），低速冷凍離心機(jī)（臺(tái)式或立式均可）3,000~4,000rpm, 4℃～5℃，15～20分，棄沉淀，即得到粗制的病毒液，可用負(fù)染法處理（用毛細(xì)管吸取懸液，滴在帶有支持膜的銅網(wǎng)上，根據(jù)懸液內(nèi)樣品的濃度可立即或放置數(shù)分鐘后，用濾紙從液珠邊緣吸去多余液體，然后滴上負(fù)染液（常用重金屬鹽配置：如PTA（磷鎢酸）、KPT（磷鎢酸鉀）、NaPT (磷鎢酸鈉)、醋酸鈉、甲酸鈉、鉬酸銨等等）、染色時(shí)間1～2分鐘，然后用濾紙吸去染液，待干燥后上透射電鏡觀測(cè)。如果粗制液中病毒成份極少，透射電鏡觀測(cè)不到，則可把懸液用離心濃縮儀濃縮；或用超速離心機(jī)，固定角式轉(zhuǎn)頭40,000rpm ×45 分鐘，5℃取沉淀制成懸液上電鏡觀測(cè)。或用40,000rpm的甩平轉(zhuǎn)頭，30％～50％W/W 線性蔗糖梯度32,000rpm×50 分，5℃，病毒集聚在1.15～1.18g/cm3之間的某個(gè)位置形成純樣品區(qū)帶；或用Ficoll,30％～40％W/W 線性梯度，病毒沉降在1.13～1.15g/cm3之間；或用Percoll作平衡等密度離心，自形成梯度，病毒懸液與Percoll混合，初始密度1.05g/cm3，用0.01M Tris-HCL作滲透平衡液，日立超速離心甩平轉(zhuǎn)頭P28S（上海天美肯公司購(gòu)自）或SW28（貝克曼）轉(zhuǎn)頭，20,000rpm×30分鐘，5℃。病毒在1.06 g/cm3附近形成純樣品區(qū)帶。當(dāng)然，也可以用溴化鈉（鉀）或碘化鈉（鉀）梯度進(jìn)行禽流感病毒的純化。 |
2樓2011-08-16 13:47:10
3樓2011-08-16 13:49:59
wppzz
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6樓2012-09-08 02:19:15
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