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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » SDS-PAGE
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yuehuashou新蟲 (初入文壇)
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[求助]
SDS-PAGE
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| 昨天做SDS-PAGE，結果：marker的條帶清晰，比上樣孔稍寬，卻沒有出現(xiàn)樣品條帶，分離膠內出現(xiàn)了大面積彌散，且彌散邊緣染色明顯較深。跑膠的時候觀察到各泳道溴酚藍相連呈波浪狀（每樣品孔上樣量不同，是否與此相關）。跑膠用的所有試劑都是一周前配的。求高手分析結果的原因。 |
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2樓2011-08-18 10:31:33
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
1949stone(金幣+4): 鼓勵 2011-08-18 11:05:34
1949stone(金幣+4): 鼓勵 2011-08-18 11:05:34
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你說marker有條帶，但是既然比上樣孔寬，說明也彌散了。如此分析，可能是膠不均勻，散的如此嚴重，我認為只有一種可能，那就是網孔壓根沒有成型，這個問題只能怪藥品了，你說藥品是剛配的，但不代表沒問題。 丙烯酰胺30%的很重要，但是一般不會出問題，它是形成網孔的前體物質，在催化劑APS和TEMED催化下，會形成聚丙烯酰胺，根據不同的濃度，會形成不同網孔的膠。所以，APS與TEMED呢，也容易失效，APS要密封干燥保存，TEMED也最好分裝，拿一小瓶出來用就行了。自己可以做個試驗看看是否是藥品問題，如果APS不行，會影響網孔的成形，如果是TEMED不行，會影響凝膠時間。 |
3樓2011-08-18 10:53:28
4樓2011-08-18 10:56:18
tony0628
木蟲 (小有名氣)
阿郎哥
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- 專業(yè): 生物化學
5樓2011-08-18 16:53:17
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