 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1459 | 回復(fù): 4 | ||||
| 本帖產(chǎn)生 1 個(gè) MolEPI ，點(diǎn)擊這里進(jìn)行查看 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[求助]
關(guān)于野生菌為宿主表達(dá)的三親結(jié)合法
|
||||
| 我現(xiàn)在在污水中分離出一株枯草芽孢桿菌，我現(xiàn)在想把我分離的外源基因轉(zhuǎn)入此菌中，我看現(xiàn)在網(wǎng)上資源有些做野生菌的表達(dá)用的是三親結(jié)合法，就是，供體菌、輔助菌、受體菌三種菌混合培養(yǎng)的一種廣法，但是這方面的資源特別的少，我想知道這種方法中用的載體哪種比較好，是用的大腸表達(dá)載體、枯草表達(dá)載體還是穿梭表達(dá)載體。就是除了三親結(jié)合法，之外還有沒有好的構(gòu)建工程菌的方法了。謝謝了，我才來不久金幣有些少，請(qǐng)大家多包涵了。 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 【分子生物】EPI帖 | 微生物+英語(yǔ)+情商=？ |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有191人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 微生物學(xué)考研資料1(沈萍版同步）免幣分享
已經(jīng)有67人回復(fù)
Petter_JDW
木蟲 (小有名氣)
- MolEPI: 2
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 3493.5
- 散金: 1528
- 紅花: 6
- 帖子: 274
- 在線: 429.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 1349191
- 注冊(cè): 2011-07-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 乳腺腫瘤
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): good 2011-08-25 07:48:09
鉛釙鍶釔(金幣+10): 2011-08-29 10:28:10
dhd997(金幣+5, MolEPI+1): good 2011-08-25 07:48:09
鉛釙鍶釔(金幣+10): 2011-08-29 10:28:10
|
芽孢桿菌屬的一般比較難轉(zhuǎn)化得了~我們實(shí)驗(yàn)室通常用一下方法~希望能對(duì)你有用 ①取受體菌接種于BY培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)早中期。此時(shí)OD620應(yīng)在0.4左右，培養(yǎng)時(shí)間約為4～5小時(shí)。 ②將培養(yǎng)后的菌液離心，棄去上清液，再用生長(zhǎng)培養(yǎng)基（GM液）洗菌一次，然后將菌體細(xì)胞重新懸浮在與BY培養(yǎng)液等體積的GM液中。37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期。此時(shí)OD620應(yīng)在0.6～0.9，培養(yǎng)時(shí)間約為3～5小時(shí)。 ③以1:10的比例將GM液中培養(yǎng)的菌液稀釋于轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基（TM液）中。即取菌液0.2ml加入1.8mlTM液中，在20×150mm的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)90分鐘。 ④加入供體質(zhì)粒，至最終濃度1ug/ml，于20×150mm的試管中，37℃振蕩培養(yǎng)30分鐘。 ⑤取200ul涂布抗性選擇平板，37℃培養(yǎng)48小時(shí)。 【培養(yǎng)基配方】 A. BY培養(yǎng)基：牛肉膏5g，酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化鈉5g，葡萄糖5g，蒸餾水1000ml，pH7.5。 B. 1×最低鹽溶液：K2HPO4 14g（K2HPO4•3H2O 18.34g），K2HPO4 6g，(NH4)2SO4 2g，檸檬酸鈉（Na3C6H5O7•2H2O）1g，MgSO4•7H2O 0.2g，在蒸餾水中依次溶解，加水至1000ml。 C. L- trp溶液，2mg/ml，貯于棕色瓶?jī)?nèi)，用黑紙包裹。（過濾滅菌） D. 生長(zhǎng)培養(yǎng)基：GM，使用時(shí)混合比例。1×最低鹽溶液100ml，1M硫酸鎂0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.4ml，10%酵母汁1ml，L-trp 50ug/ml。 E. 轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基：TM，使用時(shí)混合比例。1×最低鹽溶液100ml，1M硫酸鎂0.5ml，50%葡萄糖1ml，5%水解酪蛋白0.2ml，L-trp 5ug/ml。 其中 50% 葡萄糖 過濾滅菌 5%水解酪蛋白和10%酵母汁均可高溫滅菌 至于載體你可以試試 pAX01這是一個(gè)適用于芽孢桿菌屬的過表達(dá)載體  |
4樓2011-08-24 22:55:50
天使托
專家顧問 (職業(yè)作家)
T.Shen
-
專家經(jīng)驗(yàn): +57 - MolEPI: 106
- 應(yīng)助: 95 (初中生)
- 貴賓: 0.263
- 金幣: 16332.8
- 散金: 593
- 紅花: 74
- 沙發(fā): 9
- 帖子: 3652
- 在線: 289小時(shí)
- 蟲號(hào): 441757
- 注冊(cè): 2007-10-27
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
- 管轄: 微生物
3樓2011-08-24 09:56:16
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 大口吃飯 身體健 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 312求調(diào)劑 +4 | 陌宸希 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5 | 緒幸與子 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] [導(dǎo)師推薦]西南科技大學(xué)國(guó)防/材料導(dǎo)師推薦 +3 | 尖角小荷 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +3 | lemonzzn 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿211 0703方向310分求調(diào)劑 +3 | 努力奮斗112 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑 290分有科研經(jīng)歷，論文在投 +7 | 膩膩gk 2026-03-14 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 機(jī)械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856專碩279求調(diào)劑 +5 | 加油加油！? 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 308 085701 四六級(jí)已過求調(diào)劑 +7 | 溫喬喬喬喬 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703，333分求調(diào)劑 一志愿鄭州大學(xué)-物理化學(xué) +3 | 李魔女斗篷 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] （081700）化學(xué)工程與技術(shù)-298分求調(diào)劑 +12 | 11啦啦啦 2026-03-11 | 35/1750 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | 【上上簽】 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 277求調(diào)劑 +4 | anchor17 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考博] 2026年博士申請(qǐng) +3 | QwQwQW10 2026-03-11 | 3/150 |
|