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一曲清心新蟲 (初入文壇)
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[求助]
小麥葉片RNA實時熒光Ct值過高
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 小蟲最近想做小麥葉片RNA的表達分析，cDNA做了1、2、4、8、16、32、64、128倍的稀釋梯度，用內(nèi)參GAPDH跑，怎么Ct值都在32~34之間�。烤尤粷舛雀叩腃t值比濃度低的Ct值大！擴增效率沒問題，有的濃度下重復(fù)不是很穩(wěn)定，求高手幫忙解釋。 |
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2樓2011-08-27 17:45:35
3樓2011-08-27 19:47:48
一曲清心
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4樓2011-08-27 22:38:35
★ ★ ★
jhu132llh(金幣+3): good,引經(jīng)據(jù)典，鼓勵熱心蟲友積極應(yīng)助 2011-08-29 16:52:35
jhu132llh(金幣+3): good,引經(jīng)據(jù)典，鼓勵熱心蟲友積極應(yīng)助 2011-08-29 16:52:35
| 具體的熒光定量還是比較復(fù)雜的，你可以試試做做NTC，就是沒有做反轉(zhuǎn)錄的RNA為模板試試，看有沒有基因組的污染，你做的溶解曲線咋樣，擴增特異性，還有引物設(shè)計等等，有些熒光定量試劑盒是對于引物是有他自己的要求。。。熒光定量最重要的一個是模板一個是你的樣品，還有就是你的試驗設(shè)計。。。看你上面說的，你做這個試驗時間長嗎，你稀釋的時候樣品混勻有點問題，還有就是加樣品的時候是不是標(biāo)準(zhǔn)，一般槍頭上最后的一滴也是要加進去的。。。慢慢試試，，， |
5樓2011-08-29 11:07:05
一曲清心
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6樓2011-08-30 08:22:20
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