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hejiansgbo新蟲 (小有名氣)
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[求助]
兩個(gè)基因序列能不能做熒光定量PCR？請(qǐng)教大家一下�。。�
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相似度為89%的兩個(gè)基因序列能不能做熒光定量PCR 我想做醇脫氫酶（ADH）基因的表達(dá)檢測(cè)，但ADH1與ADH2的基因序列有89%的相似度，請(qǐng)問(wèn)各位高手：是否有辦法通過(guò)設(shè)計(jì)不同的引物把2段基因中相似度較低的序列P出來(lái)，定量PCR？ 我設(shè)計(jì)過(guò)引物，好像ADH1與ADH2兩條基因無(wú)法分開P出來(lái)，請(qǐng)大家解惑，謝謝！ |
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wanhscn
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2樓2011-08-27 21:33:00
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3樓2011-08-28 16:15:38
adslye
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【答案】應(yīng)助回帖
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amisking(金幣+4, BioEPI+1): 想當(dāng)專業(yè)�。� 2011-08-28 20:21:44
amisking(金幣+4, BioEPI+1): 想當(dāng)專業(yè)�。� 2011-08-28 20:21:44
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1.建議用探針?lè)�，設(shè)計(jì)引物理論上可以區(qū)別開差異。但是real-time引物質(zhì)量還是有點(diǎn)要求的，很可能那僅有的差異序列不適合做引物（CT值低，TM低，有錯(cuò)配等等。） 2.探針?lè)�，比如：AB公司的Teq MAN 探針有一個(gè)專利，就是RGB小溝結(jié)合物（可提高局部TM）。因此它可以很好地區(qū)別差異序列，理論上13-18bp大小的探針序列中只要有2個(gè)堿基不同就能很好區(qū)分。雜志認(rèn)可度高，方便今后投文章。 3.如果樓主沒做過(guò)real-time。探針?lè)ǖ暮锰幘透嗔耍阒苯咏o序列給公司，公司一條龍服務(wù)。自己跑個(gè)PCR就好，省了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)階段。 |
4樓2011-08-28 18:10:35
wanhscn
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5樓2011-08-28 19:45:10
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